B16细胞的传代

细胞增殖快非常好养，但是要及时换液，否则也很容易死亡、或变形。我养的最好的时候，天天都在换液，两三天就要消化传代。我用的消化液一般是 消化用含EDTA的胰酶0.25%，个人感觉效果比较好一点。

消化步骤：吸出培养液，加入PBS洗涤（视培养瓶大小加入相应的量，25CM加入1-2ML）而后加一次胰酶（25CM培养瓶加0.6ML）作用2-3分钟，轻轻摇晃使均匀作用在细胞层面上。

要一直在显微镜下观察，以防消化过头，等细胞从梭形变成椭圆形（或是棱角变钝），本来连成片的细胞之间开始有小小的空间，细胞与细胞好象是一粒粒的，界限清楚，这时是消化的最佳时机。（细胞的活力最好，又非常容易吹打）加入培养液进行吹打十几次即可。

如果消化到细胞全部飘起来，就消化的稍微有点过了。如果细胞的形态还是老样子，就消化的有点不足，吹打起来十分费力，有大片的细胞就会贴在壁上，起不来，而且很不均匀。只好重新加胰酶消化。

还有就是细胞长的比较密时，胰酶可以比平时多加一点，消化时间适当延长。