动物成体干细胞制备技术-脐带间充质干细胞的制备

脐带是连接胎儿与胎盘的条索状组织，其表面有羊膜覆盖、呈灰白色，脐带中央有一条脐静脉两条脐动脉。血管周围为含水量丰富的来自胚外中胚层的胶样胚胎结缔组织，称为华通胶（Wharton jelly）。免疫学表明从脐带华通胶中分离到的成纤维样细胞具有多能干细胞的潜能。

材料与仪器

器材：

① 2 把尖解剖剪：长 10 cm，两个 Perry 镊：长 12.5 cm；注射器

② 200 目筛网

③ 100 mm 培养皿、15 ml 离心管

④ 离心机、培养箱

⑤ 7 号针头、4 号半针头

试剂：

① 材料：6～8 周龄雄性 Sprague-awley 大鼠

② UCMSC medium：82% α-MEM ＋ 15% FBS ＋ 1% NEAA ＋ 1% L-Glutamine ＋ 1%Streptomycine-Penicillin+2ng/ml BFGF

③ PBS（1000 ml）：0.57 g Na，HPO4 ＋ 8 g NaCl ＋ 0.25 g KCl ＋ 0.25 g KH2PO2

步骤

脐带间充质干细胞的制备的基本过程可分为如下几步：

1. 取正常脐带 10 cm，两端丝线结扎，浸泡在含血清培养液中带回实验室。

2. 于超净台内取出脐带，75% 乙醇消毒脐带表面 2～3 分钟，剪开两端结扎丝线。

3. 2%SPPBS 充分洗涤残留的血液，将脐带剪成 2 cm 小段，放入培养皿中。

4. 再次漂洗 3～4 遍，剖开脐带，剔除脐静脉、脐动脉，剥离华通胶。

5. 将华通胶剪成 1 mm3 大小，均匀铺在培养瓶内，标记为原代细胞（Pa）。

6. 倒置于放入 37 ℃、5% CO2 培养箱中过夜。

7. 24 小时后，将培养瓶翻转加入 4 ml 液体培养，每天观察细胞生长情况。

8. 待细胞长至 80%～90% 融合时传代。