心血管系统组织学分析实验-TTC 染色法检测心肌梗死

对于缺血再灌注或冠脉结扎致心肌梗死的小鼠模型，使用 TCC 染色定义心肌梗死面积。

材料与仪器

器材：解剖工具等。

试剂： 2% 伊文思蓝；2% 红四氮唑（TTC）；PBS；4% 多聚甲醛。

步骤

1、配制试剂：2% 伊文思蓝（Evans Blue）：2 g Evans Blue 粉剂，充分溶解于 PBS 缓冲液，室温避光保存；2% 红四氮唑（TTC）：2 g TTC 粉剂，溶解于 PBS 缓冲液，室温避光保存。

2、对于用于检测的心脏，如梗死手术后或体外缺血再灌注的心脏，从主动脉连续灌注 2% 伊文思蓝 3~4 ml，整齐地放在冰冷的铁板上，-20 ℃ 保存过夜。

3、取出冷冻的心脏，在冷冻状态下用预冷的刀片沿左心室长轴将心脏均匀地连续切片，使每片厚 2~3 mm。

4、将切取的心脏厚片置于 2% TTC 溶液中，37 ℃ 孵育 15~30 分钟。

5、取出切片，PBS 漂洗片刻，整理平整后于 4% 甲醛溶液中固定。

6、拍照统计与比较结果。染色后的心肌片正常呈 3 种不同的颜色，蓝色为正常心肌组织，红色为缺血心肌组织，灰白色为坏死心肌组织。通过拍照后统计不同小鼠相同位置切片上不同染色的面积比例，定义心肌梗死程度。

注意事项

1、染色过深或过浅可能和染色时间有关，注意根据情况适当调整染色时间。

2、取材要完整，取材后放低温冰箱速冻以便于后续切片。