大鼠ES细胞技术-大鼠ES的建系

胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的一种多能性干细胞，是最经典的多能性干细胞，它位于个体发育的顶端，具有发育的全能性，能够分化为组成机体的所有类型的细胞，进而形成机体的任何组织和器官，并具发育成完整个体的能力。

材料与仪器

器材：

① 无菌手术器械

② 显微镜

③ 注射器

④ 培养箱、培养皿

试剂：

① 鼠

② trypsin/EDTA

③ MEF 培养基培养液

④ PBS、麻醉剂、以 70% 乙醇等

步骤

大鼠 ES 建系的基本过程为：

1. 获取自然受精后 4. 5 天的 DA 大鼠子宫；

2. 用胚胎操作液 M2 冲出植入前的 DA 大鼠囊胚；

3. 利用倒置显微操作系统去掉囊胚透明带；

4. 移入提前加有大鼠胚胎干细胞培养液并铺有滋养层细胞的四孔板上；

5. 培养 3 天后内细胞团贴壁生长，形成克隆突起；4～6 天时挑取细胞克隆，使用添加了 10% 胎牛血清的 0. 05% 胰酶消化为单细胞后，移入新的四孔板上生长；

6. 此后每天更换新的大鼠胚胎干细胞培养液，每 3 天传代一次；大鼠胚胎细胞的生长状态既有贴壁生长又有悬浮生长，需要在换液时收集培养液，将沉淀细胞传代于新的培养皿上。