骨髓细胞移植实验

器材：

① 注射器

试剂：

① IMDM；

② 1x PBS；

③ 酸化抗生素水。

步骤

骨髓细胞移植实验的基本过程可分为如下几步：

（一）准备骨髓移植受体小鼠

A 受体小鼠在接受辐射 1 周前，要饲喂酸化并添加抗生素的灭菌水。

B 受体小鼠接受辐射后 2 周内要继续饲喂酸化并添加抗生素的灭菌水，然后才可以改喂酸化但不含抗生素的饮用水。

C 对 C57BL6／J 小鼠而言，辐射剂量是 10 Gy 的伽马射线，受体小鼠要在 4 小时内接受尾静脉骨髓移植手术。

（二）准备移植用供体骨髓细胞

A 收获供体小鼠股骨，保存在 RPM11640（2％ FBS，10 U/mL 肝素＋青霉素＋链霉素）。

C 用注射器冲洗股骨骨髓腔，用灭菌的 40 μm 细胞滤器过滤骨髓细胞。

C 用无血清的 RPMI1640 冲洗细胞，4 ℃ 离心 5 分钟，转速 2000 r/mi。

D 用 25 mL 无血清 RPMI 重悬细胞，细胞计数。

E 无血清 RPMI1640 调整细胞浓度至 1x10 cells/mL。

F 对受体小鼠进行尾静脉注射骨髓细胞，每只小鼠注射 0.5 mL 细胞液，即 5x106细胞。

（三）酸化抗生素水制备

A 用 HCl 将水的 pH 调至 2.6，灭菌。

B 每升酸化水加 10 mL 新霉素（10 mg/mL）和 400 μL 硫酸多黏菌素 B（25 mg/mL），过滤灭菌。