动物胚胎冷冻保存技术-动物胚胎冷冻保存技术常规缓慢冷冻法

动物胚胎冷冻保存技术常规缓慢冷冻法，是最早建立的胚胎冷冻方法，该方法的优点是脱水完全、细胞内冰晶形成少、缺点是比较费时，且保护剂对胚胎作用时间长、毒性大，并需要专门的程序降温。

材料与仪器

器材：

0.25 mL 细管、冷冻仪、液氮罐。

试剂：

①胚胎;

②甘油 ;

③PBS ;

④PBSS（含 20%NCS 的 PBS）。

步骤

动物胚胎冷冻保存技术常规缓慢冷冻法的基本过程可分为如下几步：

A. 将胚胎依次放入含 0. 7 mol/L 甘油的 PBS 和含 1.4 mol/L 甘油的 PBSS 中，分别平衡 7-10 分钟；

B. 然后将胚胎装入 0.25 mL 细管的中部，并在细管两端加入冷冻液，每端冷冻液和含有胚胎的中间段均用气泡隔开；

C. 将细管放入预先冷却至-7 °C 的冷冻仪中平衡 10 分钟；

D. 待以 0.3 °C/min 的速度降温至-35 °C 后，将细管投入液氮保存。