流式细胞术检测实验-流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数

器材：

① 流式细胞仪管

② 手术器械

③ 1 mL 注射器

④ 流式细胞仪（BD FACSCalibur）。

试剂：

① e-Kit-APC

② Sca-1-FITC

③ phycoerythrin-conjugated lineage marker cocktail

④ containing CD3-PE

⑤ CD5-PE

⑥ B220-PE

⑦ Gr-1-PE

⑧ Ter119-PE（eBioscience）

⑨ 1x PBS

⑩ FBS。

步骤

流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数的基本过程可分为如下几步：

A 收集 E14.5 胎肝细胞，1 mL 注射器分离胎肝成单细胞悬液，并用细胞滤器过滤细胞悬液。

B 胎肝总细胞数计数。

C 2％ FBS/PBS 液洗一次。

D 分别加入 c-Kit-APC（1:800），Sca-1-FITC（1:800），phycoerythrin-conjugated lineage marker cocklail（1:800），Ter119-PE（1:800）。

E 4 ℃ 孵育，30 分钟，避光。

F 加 500 mL 2％ FBS/PBS 液，微振荡。

G 250 g 离心 5 分钟。

H PBS 液离心洗 2 遍，每次 5 分钟；流式细胞仪分析 Lin c-Kit＇Sca-1＇细胞数。结果示例如图8-8-3。

注意事项

1. 正式收取数据前要先用空白对照和单染的阴性对照，做好仪器的校正工作。

2. 上流式细胞仪的细胞液样本绝对不容许有组织残留，否则极易引起仪器内部管道堵塞。