早产儿视网膜病变动物模型的建立

早产婴儿其周边视网膜血管尚未发育，存在着血管未发育区域，是早产儿视网膜病变的发病机制。

原理

将小鼠放入高氧环境会出现视网膜血管增生类似 ROP 的现象。

用途

本模型是研究早产儿视网膜病新生血管发生机制及相关治疗的合适模型。

材料与仪器

动物模型：

0-7 日龄小鼠。

器材：

注射器、明胶海绵、眼科剪。

试剂：

①1% 水合氯醛；

②酒精。

步骤

早产儿视网膜病变动物模型的造模方法如下：

（一）模型制备：

A、清洁级 Wistar 鼠仔及其哺乳母鼠置入密闭的氧箱内，接 100% 湿润医用纯氧，调节气体流量 0.5-0.75L/min，每天 3 次 (9 am、2 pm、6 pm)。

B、用测氧仪监测出气管中的氧浓度，使其保持在 75%±1%；温度保持 22-25 ℃，湿度 50% -70%。

C、2 天 1 次更换箱内垫料饲料及母鼠，开箱约 0.5 小时。

D、在此环境中饲养 5 天后，从氧箱中取出，在常氧环境中饲养。

（二）检测方法：

方法一：网膜铺片

生后第 12 天 (P12)、14 和 17 天分别进行视网膜铺片 (ADP 酶染色法)。

A、1% 水合氨醛腹腔麻醉 (1 mL/kg)，断头取出眼球，眼科剪去除角膜，眼科镊夹住视神经根部，用小毛刷由视神经根部轻轻向前挤压，去除晶状体和玻璃体，剥离视网膜，固定于 4% 多聚甲醛过夜。

B、用 Tris-马来酸缓冲液漂洗，置于 37 ℃ 反应液中孵育 15 分钟，在 10% 硫化铵中反应 1 分钟。

C、在光学显微镜下观察视网膜血管形态、分布及数量。若视网膜血管形态异常为合格模型。

方法二：网膜组织切片制作及观察

A、鼠仔颈椎脱白处死，摘取眼球。将眼球浸泡在 4% 多聚甲醛固定液中，固定 48 小时后常规脱水。

B、石蜡包埋，平行于角膜至视盘的矢状位连续切片，贴片，厚度 46 μm，每只眼球选取 20 张切片 (去掉有视神经的切面) 用于检查。

C、苏木素伊红 (HE) 染色切片 , 在显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量。可反映视网膜血管的增殖。