家兔配子和卵巢冷冻保存技术-家兔卵巢的冷冻保存

卵巢冷冻被认为是将来建立卵子库的一项新技术。对于男性和雄性动物而言，精子库的建立为品种保存和遗传资源提供了保障。而对于女性和雌性动物，人们也正在寻找一种生殖保障。

通过卵巢冷冻保存来获取成熟卵子是现阶段一种最有效的途径，卵巢移植可不考虑年龄、生殖周期，甚至可从临近死亡的雌性动物中获得卵巢，因而优势明显。

因此将卵巢组织冷冻保存，在需要的时候再进行移植将是一种更为有效的保存雌性生殖能力的方法。

材料与仪器

器材：

①冻存管

②37 ℃，5％ CO2培养箱

③37 ℃水浴锅

④程序冷冻仪

试剂：

①材料：家兔卵巢

②液氮

③平衡液：1.5 mol／L PROH＋0.1 mol／LS＋10 mg／ml HSA。

④含5％ HAS的EBSS

⑤PBS

步骤

家兔卵巢的冷冻保存的基本过程可分为如下几步：

1．家兔卵巢的冷冻（PROH程序化冷冻方法）

（1）将卵巢组织块投入平衡液（1.5 mol／L PROH＋0.1 mol／LS＋10 mg／ml HSA）中室温下平衡90分钟，装入0.5 ml冻存管中放入程序冷冻仪，从室温开始以2 ℃／min降至-8 ℃。

（2）植冰，以0.3 ℃／min降至-30 ℃，以10 ℃／min降至-120 ℃，再投入液氮中进行长期保存。

2．家兔卵巢的复苏

（1）将冻存管取出，在空气中缓冲30秒，然后放入37 ℃水浴中2～3分钟，室温下以1.0 mol／L、0.5 mol／LPROH梯度递减洗脱冷冻保护剂，PBS液冲洗3遍。

（2）将组织块移入含5％ HAS的EBSS中，最后移入37 ℃，5％ CO2培养箱中待用。