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感受态细胞的转化实验流程
1. 取 100μl 感受态细胞于冰浴上融化。2. 加入 1μl 纯质粒或连接产物,轻轻吹打混匀,冰浴 30 min。3. 将菌液放入 42℃水浴中热激 90
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各种转染方法比较
转染方法 原 理 主要 应用 特 点DEAE-葡聚糖法 带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 瞬时转染相对简便、重
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DEAE-葡聚糖转染法
DEAE-葡聚糖介导的转染,其原理还不清楚,可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核,此法只适合暂时转染实验,转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与DNA
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脂质体介导DNA转染法
脂质体(lipofectin regeant,LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2,3-Dioleyoxy, Propyl]-n, n,n-Trimethyla
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外源质粒DNA转化大肠杆菌
摘要: 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌1 实验简介
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细胞转染技术原理及应用
摘要: 讲述细胞转染技术分类,并分别介绍各种转染方法的原理、应用、特点,及各种转染方法的比较.常规 转染 技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久
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超级感受态细菌制备
碧云天生产的超级感受态细菌制备试剂盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一种用于快速制备高转化效率大肠杆菌 感受态细菌的
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细胞转染技术简介
转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。一些传统的转染技术,如DEAE右旋糖苷法,磷酸钙法,电
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磷酸钙-DNA共沉淀法
核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时,可使DNA附在细胞表面,利于细胞吞入摄取,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内,进入细胞的DNA仅有1%~5%可
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感受态细胞制备实验
一、CaCl2 感受态细胞的制备的实验步骤1.前夜接种受体菌( DH5α或 DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时);2.取 1m
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酿酒酵母感受态细胞的制备、转化
酿酒酵母感受态细胞的制备(1)从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基,30℃,250 rpm 培养过夜。(2)测定
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感受态细胞转化操作流程及提高转化效率的建议
摘要: 下文是感受态细胞转化操作流程及提高转化效率的建议.1、在冰上预冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圆底 离心管 .1支用来转化样品,1支做pUC1
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感受态细胞的制备及溶液配制
1. 挑取适当菌株的 E.coli 单菌落接种于 2mlSOB 培养液中,37℃摇床过夜。2. 取 0.5-1ml 过夜培养的菌液 转种到 50ml SOB 中
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大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法
常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA,所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl,RuCl等化学试
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高效率感受态细胞的制备注意要点
大肠杆菌的感受态制备及转化关于大肠杆菌的感受态制备及转化的方法很多,最复杂的莫过于电转化,而最简单的则是将LB平板上的菌落直接挑入装有缓冲液的EP管冰箱即开始转