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细胞膜蛋白质提取方法
NRC Institute for Biological science s Triton X-114 extraction protocol (Hydrop
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融合蛋白的表达系统常见问题
蛋白表达技术全攻略研究者们在分离到某一基因后,要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即:有目的性地合成外源基因产物.在重组DNA 技术的发展早期,
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GST融合蛋白表达与纯化的实验步骤与注意事项
GST表达融合蛋白载体pGEX-KG大小:5006bp,氨苄青霉素抗性(Ampr),IPTG诱导表达酶切位点:BamHI 930、SmaI 937、EcoRI
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酵母双杂交实验常见问题
1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着
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凝胶层析法脱盐和分离蛋白质
(一)原理凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐”(desalthing)
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亲和层析技术
(一)原理亲和层析是一种吸附层析,抗原(或抗体)和相应的抗体(或抗原)发生特异性结合,而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原(或抗体)固相化后,就可以使
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醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白
[目的与原理] 掌握醋酸纤维素薄膜电泳原理及操作技术,利用该电泳技术分析和测定人或鱼血清中各种蛋白质相对百分含量。醋酸纤维素薄膜电泳(cellulose ace
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金属螯合亲和层析分离蛋白质
【实验目的】1.学习亲和层析的原理。2.掌握亲和层析法分离蛋白质的技术与操作。【实验原理】亲和层析是以普通凝胶作载体,连接上金属离子制成螯合吸附剂,用于分离纯化
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蛋白浓缩方法详解
1,透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6000-12000)聚合物如
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蛋白质与多肽提取分离
1、分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离
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浅析蛋白纯化方法及其优缺点
1. 蛋白沉淀蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸,在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或者特别低,蛋白则倾向于从溶液中析出。硫酸铵是沉淀蛋白最常用的盐,
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超滤实验基本步骤
1. 配料;2. 检查出口阀门是否关闭,搅拌料浆;3. 启动泵,打开出口阀,开始超滤;4. 改变压力,观察不同压力对超滤的影响;5. 配制不同浓度的悬浮液进行超
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SPA的纯化
1.DEAE-Sephadex A-25离子交换层析法⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液平衡DEAE-Sephadex A-25柱。 ⑵ 加样后,用
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凝胶过滤注意事项
1.层析柱的选择层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择。一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高;但层析柱
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凝胶层析的优缺点
1.凝胶层析操作简便,所需设备简单。有时只要有一根层析柱便可进行工作。分离介质—凝胶完全不需要像离子交换剂那样复杂的再生过程便可重复使用。2.分离效果较好,重复