siRNAs制备的方法
目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括:1.化学合成2.体外转录3.长片断dsRNAs经RNase III 类降解4.siRNA表达载体或者病毒载体在
目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括:
1.化学合成
2.体外转录
3.长片断dsRNAs经RNase III 类降解
4.siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs
5.PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达
前三种方法经过体外制备siRNAs然后应用专门的RNA转染试剂将siRNAs转到细胞内转染或者电转染导入哺乳动物细胞；后两种方法则这两种方法的优点在于不需要直接操作RNA，依赖能够表达siRNAs的DNA载体或者基于PCR的表达框架转染到细胞中，通过转染到细胞的DNA模板在体内的转录得到siRNAs。每种方法都有自己的优点和缺点。哪种是最好的方法，其实取决于实验目的。
比较项目 | 体外制备 siRNA | 体内表达 siRNA | |||
化学合成 | 体外转录 | RNase III 降解 dsRNA | SiRNA 表达载体 | PCR 表达框 | |
设计和筛选最有效 siRNA 序列 | 需要 | 不需要 | 需要 | ||
材料需求 | 21ntsiRNA | 29nt siDNA | 转录模版 (200- 1000 bp ) | 45-50nt dsDNA | ~50nt dsDNA |
制备规模 | 大量 | 受限 | 大量 | 受限 | |
合成 / 制备 转染 所需时间 | 4 天 -2 周 | dsDNA 合成时间 1 天 | 转录模版制备时间 1 天 | dsDNA 合成时间 5 天以上 | dsDNA 合成时间 6 小时 |
个人所需操作时间 | 几乎没有 （只需定购） | 中等 | 长 | 中等 | |
标记 siRNA 进行 细胞定位 | 能 | 不能 | |||
转染的难易程度 | 专门的 RNA 转染试剂或者电转染 | DNA 转染 ，不直接操作 RNA | |||
检测总体转染效率 | 不能 | 能 | 不能 | ||
抑制时效（即稳定性） | 短暂 | 长期 | 短暂 | ||
制备费用 | 高 | 相对较低 | 低 | 中等 |
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