MHC-I单体的S300 柱层析

MHC-I 单体的S300 柱层析       在上述生物素化的样品中，折叠为单体的HLA-I类分子相当于样品中S300的组分。经过S300柱层析，可从样品中分离出折叠为单体的HLA-I类分子   【试剂及材料】 1、   材料 （1）层析蠕动泵（Hiload Pump P-50，Pharmacia) （2）紫外监视仪（Monitor UV-1，Pharmacia) （3）部分收集器（RediFrac Fraction Collector，Pharmacia) （4）层析记录仪（Chart Recorder， Pharmacia) （5）层析柱（Hiprep 26/60 Sephacryl S-400 Size exclusion column， Pharmacia) 2、   试剂       层析缓冲液：20mM Tris(PH8.0)；150mM NaCl （4 o C预冷）   【操作步骤】 （1）准备好足够量的层析缓冲液，按照操作程序接好层析装置，将进样口与出样口接通，使缓冲液在层析柱中循环，去除柱子中的气泡。 （2）将层析装置调至进样位置，用注射器将样品缓慢注入柱子。小心不要引入气泡。 （3）接通蠕动泵，将流速调至2ml/分钟。收集4分钟流出物（8ml）。   【注意事项】     不同的层析装置的进样方式可能不同，但注意不要在进样时让气泡进入层析柱中。