PCR扩增标本的HLA-DR基因

PCR 扩增标本的HLA-DR基因   （一）扩增引物 HLA-DRB1基因扩增引物为：5’-CCGGATCCTTCGTGTCCCCACAGCACG-3’ 5’-TCGCCGCTGCACTGTGAAG-3’   （二）PCR扩增体系 （1）         1.0uM 扩增引物 （2）         300ng待测样本基因组DNA （3）         2.0U Taq多聚酶 （1）         200uM 各种dNTP （2）         用1 X PCR缓冲液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2 ，0.01%明胶）调至总体积100ul，并用50ul矿物油覆盖，防止水分蒸发。   （三）PCR扩增 （1） 采用下列PCR扩增条件进行扩增： 预变性：94℃，5分钟 变性：  94℃，30秒 退火：  55℃，50秒 延伸：  72℃，40秒 扩增循环数为33次 （2） PCR扩增完成后，取5ul进行琼脂糖凝胶电泳检查，上述引物扩增的产物长度为292bp。