免疫中和反应技术(Neutralization test technique):固定血清稀释病毒法
病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于: ① 从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病; ②
病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于: ① 从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病; ② 用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型; ③ 测定抗病毒血清或抗毒素效价; ④ 新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。
本法多将病毒作 10 倍递增稀释,分置 2 列试管,第一列加正常血清(对照组),第二列加待检血清(试验组)。混合后,置 37 ℃ 作用 1h ,将各管混合液分别接种选定的试验动物,每一稀释度用 3 ~ 5 只动物。接种后,逐日观察,并记录其死亡数,观察结束后,计算 LD50 和中和指数,本法适用于大量检样的检测。
表 固定血清稀释病毒法术式
混合前
病毒稀释
| 2 × 10-1
| 2 × 10-2
| 2 × 10-3
| 2 × 10-4
| 2 × 10-5
| 2 × 10-6
| 2 × 10-7
| -
| |
正常
血清
| 稀释病毒
| -
| -
| -
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| -
|
正常血清
| -
| -
| -
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| |
对照组
| 稀释液
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| 1.0
|
待检血清
| 稀释病毒
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| -
|
待检血清
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| 1.0
| |
中和组
| 稀释液
| -
| -
| -
| -
|