测序模板的快速纯化

测序模板的快速纯化   【材料和试剂】 （1）真空泵 （2）PEG/NaCl溶液 （3）碘化物缓冲液 （4）70%乙醇 （5）TE缓冲液      10mM Tris-HCl，pH 8.0；      1mM EDTA   【操作步骤】 （1）扩增噬斑（见上述），在第一次离心后，将500ml含有噬菌体的上清转入新的离心管中。 （2）加入200ml PEG/NaCl，颠倒混匀，室温静置10min。 （3）离心10min，倾去上清。 （4）再次短暂离心，仔细吸去残留上清。 （5）用100ml碘化物缓冲液完全重悬沉淀物，加入250ml乙醇。室温孵育10min，室温短暂孵育将选择性沉淀单链噬菌体DNA，而大部分噬菌体蛋白保留在溶液中。 （6）离心10min，倾去上清，用70%乙醇洗涤沉淀物，真空吸干。 （7）用30ml TE缓冲液重悬沉淀物。 （8）取5ml作为测序模板，或根据需要增减。