嗜碱性粒细胞功能的测定―嗜碱性粒细胞脱颗粒试验

嗜碱性粒细胞功能的测定―嗜碱性粒细胞脱颗粒试验        嗜碱性粒细胞不仅参与速发型超敏反应，而且参与机体抗肿瘤免疫应答。检测嗜碱性粒细胞的功能有助于过敏性疾病的诊断和肿瘤的预后判断。   【试剂及材料】 （1）         新鲜的抗凝血（用0.1mol/L pH7.7 EDTA抗凝血） （2）         Hanks液 （3）         Alcian蓝染液      【操作方法】 （1）         分离的嗜碱性粒细胞，用Hanks液洗2次，每次1500r/min离心10mi； （2）         吸去上清液，留约0.3ml沉淀，轻轻振摇使细胞重悬； （3）         取过敏原50μl，与细胞悬液50μl混合，放置37℃水浴30min，以同量缓冲液代替过敏原作为对照管； （4）         加Alcian蓝染液150μl，混匀，置15～25℃过夜。次日计数9大方格内染成蓝色的嗜碱性粒细胞数（F）；   【结果分析】     计算脱颗粒指数（DI）                        F对照-F测定                DI = ──────── ×100％                           F对照 判断结果以DI>30％为阳性，即嗜碱性粒细胞的颗粒释放能力增高。   【注意事项】 （1）         检测对象必须明确。应在无急性发作，停用抗组胺药，糖皮质激素，塞吡酮，茶碱类和β-兴奋剂3d后采血。采血当天禁脂肪类饮食。正常对照应无过敏史，与测定组同时采血和检测。 （2）         全过程需要无菌操作。 （3）         过敏原的种类繁多，应根据地区和季节的不同，结合临床资料，合理选择。同时还应选择合适浓度。 （4）         抗IgE及甘露醇是常用的刺激原。其中马抗人IgE的浓度以1ng/ml最佳。如改用其他批号的抗IgE，应选择最佳应用浓度后方可使用。甘露醇用来代替重水（D2 O）作为刺激原与D2 O的阳性符合率为89.66％，其配制法如下：用18％甘露醇代替蒸馏水，配制HEPES-ACM缓冲液，调整其渗透压与90％D2 O相同（1380mosn/kg H2 O）。该溶液在常温下易析出结晶，应无菌分装，使用前于56℃水浴融化结晶，冷至室温后使用。