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免疫技术

单核细胞分离

2025-06-06 免疫技术 加入收藏
铁粉吸附法 1 .材料及试剂( 1 )铁粉或羰基铁粉( Atomergic chemetals ) 99 %的纯度,颗粒小于 60 µm (Goodfellow

铁粉吸附法

 

1 .材料及试剂

( 1 )铁粉或羰基铁粉( Atomergic chemetals ) 99 %的纯度,颗粒小于 60 µm (Goodfellow Metals )。

 

( 2 )强磁铁(马蹄形)。

( 3 )一块小棒状磁铁(约 1cm 长)。

( 4 )毛细吸管等。

2 .操作方法

( 1 )称取一定量的铁粉,一般为 10g ,用 100ml 生理盐水洗涤 4 次,去除任何可溶性有毒物质。在倒去盐水时,用强磁铁吸住铁粉。

( 2 )用 50ml 生理盐水混悬铁粉。摇匀后,分装于 10 个瓶中,包扎瓶口, 121 ℃ 灭菌 20min ,拿出后立即轻轻摇匀,防止铁粉结块,储藏备用。

( 3 )临用前,倒去瓶中的生理盐水,加入适量的单个核细胞悬液( 3ml ~ 5ml ,细胞总数为 8 × 107 个/瓶)。 37 ℃ 温育 45min ,中间不时晃动,使铁粉悬浮起来。

( 4 )加入一块小磁铁棒于瓶中,让其吸住铁粉以及附着在铁粉上的细胞。

( 5 )倒出悬液,此悬液主要是淋巴细胞,离心,收集。

( 6 )在铁粉瓶内倒入一定量的 Hank’s 液,用力振摇后,以强磁铁吸附,几分钟后,倒出液体。

( 7 ) 2 000r/min 离心液体,管底即为单核细胞。

 

 

 

玻璃板吸附法

 

将分离的单个核细胞倾于无菌洁净的玻璃平皿内,置 37 ℃ 30 min ~ 40min ,用毛细吸管轻轻吸取悬液,即为淋巴细胞。用适量的 Hank’s 液冲洗平皿,收获即为单核细胞悬液。


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