Login
欢迎浏览恩派尔生物资料网
我要投稿 请登录 免费注册 安全退出

您现在的位置是: 首页 > 实验方法 > 免疫技术

免疫技术

碘同位素标记单克隆抗体

2025-06-06 免疫技术 加入收藏
同位素标记是一种重要的抗体标记技术,牨 977 年 Yalow 等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。 McAb 标记同位素后除应用于放射免

同位素标记是一种重要的抗体标记技术,牨 977 年 Yalow 等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。 McAb 标记同位素后除应用于放射免疫测定外,还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。

 

   ( 一 )  原理

 

  氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将 I 2氧化为 I +并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的 McAb 仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。

 

   ( 二 )  方法

 

      在细胞冻存管内加入纯化的 McAb100 μ g / 100 μ l ,       再加入 10 μ l 0.05M 磷酸缓冲液       再加入 10 μ l( 含 1mCi)125 I

 

          ↓

 

     加入 10 μ l 氯胺 -T(5mg / ml 溶于 0.05M 磷酸盐缓冲液 ) ,孵育时间不超过 30 秒

 

             ↓

 

      加入 100 μ l 偏重亚硫酸钠 (1.2mg / ml 溶于 0.05M 磷酸缓冲液 )

 

             ↓

 

      加入 200 μ l   KI 溶液 ( 少许结晶 KI 溶于 0.05M 磷酸缓冲液+ 4 %牛血清白蛋白 )

 

             ↓

 

      用 PD10 柱 (Sephadex G25) 除去游离 125 I       用 4 % BSA   PBS 洗脱

 

             ↓

 

      分部收集, 0.5ml /管

 

  每管取 5 μ l 进行γ计数,计算标记抗体的比活性和标记率

 

           结合于 McAb 125 I 放射性强度 (cpm)     标记率 ( % ) =───────────────────               总放射性强度 (cpm)

 

                结合于某一管 McAb 上的放射性强度     比活性 ( μ Ci /μ gMcAb) =────────────────                     某一管 McAb 总量

 

   ( 三 )  试剂器材

 

   1.  纯化后的 McAb

 

   2.   0.05M 磷酸缓冲液,氯胺桾,偏重亚硫酸钠, KI , BSA

 

   3.   125 I

 

   4.  有通风装置的超净台,γ计数仪

 

   5.   PD10 柱 (Sephadex G25)

 

   ( 四 )  注意事项

 

   1.  严防同位素污染,工作人员必须穿着工作衣,戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用 125 I 和标记物应妥善保管。

 

   2.  如标记细胞因子、激素等,应选用更温和的标记方法,使保持更好的生物学活性。


文章底部广告位

文章评论

加载中~