动物组织或材料中盐酸克伦特罗残留的快速ELISA检测

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试剂盒产地：比利时Bio-X 1. 检测原理 8. 工作液的准备 2. 操作时间 9. 样品前处理 3. 检测下限 10. 酶联免疫 实验设计 4. 回收率 11. 操作步骤 5. 交叉反应率 12. 结果计算 6. 试剂盒的组成 13. 结果分析 7．需要设备及试剂 14.注意事项 简介： 克伦特罗（Clenbuterol）属于beta兴奋剂，是一种高选择性的兴奋剂和激素，具有水解脂肪、合成代谢和对非条纹肌肉组织的松弛作用。进年来被一些人非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物的生长。当用作生长调节剂时，其添加量是治疗量的5—10倍，常在动物体内残留而给消费者带来危害。 通常，HPLC或GC-MS是克伦特罗残留检测的确证方法，但是其前处理步骤费用昂贵，而ELISA快速检测试剂盒因成本低、操作简便、速度快、一次检测样本量大、仪器化低，现已成为常规的筛选方法。 1.检测原理： 测定的基础是抗原 抗体反应。微孔板上包被有针对兔IgG（Clenbuterol抗体）的羊抗体，含有克伦特罗抗原的样品或标准品与酶标记物被加入到小孔中，经过孵育及洗涤步骤后，游离的抗原与抗原酶标记物竞争抗体结合位点，没有结合的抗原酶标记物在清洗步骤中被除去，将显色液加入到孔中并且孵育，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝色转为黄色。在450nm处测量，吸光强度与样品的克伦特罗浓度成反比。 2.操作时间： 1小时(30分钟孵育+30分钟显色) 3.检测下限： 0.1ppb 4.回收率： 尿样和血清： 97-110% 饲料： 95-100% 肝脏/组织： 90-97% 牛奶及奶粉 100% 5.交叉反应率： Clenbuterol (克伦特罗) 100% Mabuterol（马普特罗） 100% Mapenterol（马喷特罗） 100% Salbutamal (沙丁胺醇) 8-9% Terbutalin (特普他林) 7-8% Simarterol(塞曼特罗) <0.1% Isoproterenol（异丙肾上腺素） <0.1% Fenoterol（非诺特罗） <0.1% 6.试剂盒的组成： 1) 96孔酶标板：12条╳8孔（包被有抗兔IgG）. 2) 克伦特罗标准液6瓶：1ml /瓶，为Clenbuterol水溶液:0.1ng/ml，0.3 ng/ml，0.6 ng/ml，1.25 ng/ml，2.5 ng/ml，5 ng/ml. 3)酶联结合物Conjugate peroxidase： 6ml 黄盖 4) 抗Clenbuterol抗体溶液：Anti-clenbuterol antibody 11ml 红盖 5) 冲洗液（需10倍稀释）Wash buffer： 50ml 塑料瓶 6) 柠檬酸盐缓冲液Citrate buffer： 25ml 蓝盖 7)底物溶液Chromogen： 3 ml 黑盖 8)样品稀释液（需20倍稀释）Diluent solution: 10ml 绿盖 9)反应终止液Stop solution： 6ml 白盖