免疫荧光技术简介

一些基本概念和基本知识： 1 荧光免疫测定技术的概念：将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。 2.技术分类：   ⑴荧光抗体技术(荧光显微镜技术)       抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判       定结果的检测方法。   ⑵ 免疫荧光测定技术：       抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定     荧光强度而推算被测物浓度的检测方法 3.荧光的产生：           物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。           这种物质，称为荧光素                  由光激发所引起的荧光，为光致荧光                             ------荧光免疫技术             由化学反应所引起的荧光，为化学荧光                             ------化学发光技术 4.荧光素的荧光特性： ⑴ 停止供能，荧光现象随即终止 ⑵ 对光的吸收和荧光的发射具高度选择性       入射光波长<发射光波长 ⑶ 荧光效率：           发射荧光的光量子数           荧光效率=-------------------------------                             吸收光的光量子数   ⑷ 荧光猝灭现象：荧光素的辐射能力减弱 5.常见荧光素：      ⑴ FITC   ⑵ RB200   ⑶ TRITC   ⑷ 镧系：Eu、Tb   ⑸ PE   ⑹ 其它 常见荧光素的特性：   ⑴ FITC：黄色结晶粉末，吸收光：490~495nm，           发射光：520~530nm，明亮的黄绿色荧光。   ⑵ RB200： 橘红色粉末, 吸收光570nm，发射光                   595~600nm，橘红色荧光。   ⑶ TRITC： 紫红色粉末，吸收550nm，发射光                                    620nm，橙红色荧光。   ⑷ 镧系：Eu、Tb   ⑸ PE：吸收光490~560nm，发射光595nm，红色               荧光。   ⑹ 其它：酶作用后产生荧光物质。 酶作用后产生荧光物质： 酶     底物     产物     激发光   发射光 Β-G     MUG     MU       360         450 AP     MUP     MU       360         450 HRP   HPA     二聚体     317       414      6.合适荧光素的选择   ⑴ 具有与蛋白质形成共价键的化学基团。     荧光素-N=C +NH-蛋白质       荧光素-N-C-N-蛋白质                   ‖   �                         �‖ �                   S   H                           H S H   ⑵ 荧光效率高，标记后下降不明显。   ⑶ 荧光色泽与背景色泽对比鲜明。   ⑷ 标记后能保持生物学活性和免疫活性   ⑸ 标记方法简单、快速。   ⑹ 安全无毒