western blotting的一些细节-1

匀浆缓冲液的问题:   蛋白质的匀浆缓冲液的一般配方都是大同小异，里面有那么多试剂，我对其中一些试剂的功能做了查寻：   PMSF：蛋白酶抑制剂 EDTA：金属离子螯合剂 DTT：保证蛋白SH基团不被氧化 矾酸钠：酪氨酸磷酸酶抑制剂   所以匀浆缓冲液的蛋白酶抑制剂保护剂对于保护蛋白质量是非常重要的。     蛋白匀浆以后是否还会降解？ 一般认为蛋白质匀浆以后，由于蛋白质变性，所以不会容易降解。而且不会受反复冻融的影响。但实际上蛋白样品反复冻融几次后，蛋白量会明显减少。所以最好不要使匀浆后的蛋白反复冻融，并且最好不要比较不同批次匀浆的蛋白样品。