Matrigel基质胶操作注意事项
细胞外基质是特殊的复合组成,可以稳定组织,促进细胞贴壁并通过与细胞外受体的相互作用调节细胞的功能。这一类ECM对于多种细胞的培养,功能,生长,以及细胞分化中都有重要的作用。Corning基质胶是从EHS小鼠肉瘤中分离得到的一类ECM,并被广泛应用于基底膜的制备。基于基质胶的组成及特性,基质胶对于体外模拟细胞体内生长环境提供了非常重要的支持。
小TIPS:
Matrigel胶之前是BD旗下Biocoat产品线的注册产品,几年前BD将Biocoat产品线整体销售给Corning公司,现在是Corning旗下Biocoat产品线的产品,所以我们常说的BD的基质胶和corning的基质胶其实是同一个产品。
使用Matrigel® Matrix注意事项及技巧
- 接触 Corning® Matrigel® Matrix的所有容器、液体处理产品等必须要预冷。
- 在 >10°C的情况下Matrigel就可成胶将Matrigel放在冰上,在2-6°C冰箱中过夜融化尽量减少反复冻融的次数,将Matrigel分装成小份备用。
- 在分装Matrigel时,使用5-7次后更换枪头,以保证无菌和避免堵塞枪头在使用前将分装的Matrigel储藏在-20°C或-70°C- 产品要保存在非无霜冰箱中,不存放在冰箱门上,不存放在常开关的冰箱中。
- 不建议储藏在 4°C。
Matrigel 稀释注意事项
- 对于标准浓度的Corning Matrigel (~8-11mg/mL),使用预冷的无血清培养基或者PBS稀释。
- 将Matrigel加入到冰冷的稀释液中,轻轻混合- 禁止使用水稀释-可能引发胶凝固高浓度基质胶:可将冰冷的培养基直接加入到冰冻的Matrigel瓶中稀释
- 使用前在冰上完全融化 (24-48小时)- 使用或分装前通过搅拌或者上下吸液混合将分装的Matrigel在冰上融化;稀释到目标浓度。为了均匀的包被,倾斜培养器皿,将吸有Matrigel 的枪头置于升高的一边表面;轻柔的加入Matrigel。如果需要,轻柔的振荡容器以便更完全的包被表面 (注意:避免产生气泡)包被嵌套小室:将Matrigel滴加在小室膜中央位置,用枪头快速的将胶扩散,形成包被表面
- 注意:避免用枪头损害小室的膜包被后将器皿放置至室温或是在37℃保存30分钟到1个小时后成胶- 使用前将Matrigel成胶后表面的液体移除
Matrigel® Matrix 其它建议
培养容器包被Matrigel® Matrix后可以储存多久?
最好当天使用,也可选择如下方式:- 包被后可在包被表面添加一层无血清培养基,在37度温箱存放一周(薄胶和厚胶) 或者,包被后的器皿在表面添加无血清培养基存放在2-6oC (用石蜡膜封板并保证无菌状态) (单薄胶)- 如果存放在2-6°C, 使用前需要预热
Matrigel® Matrix稀释后是否可以保存剩余的产品?
不建议保存稀释后未用完的Corning® Matrigel® Matrix
为什么Matrigel ® Matrix如此粘稠?
Matrigel的粘稠度受下列因素的影响:- 蛋白浓度不同,粘度不同(批次差异),浓度越高粘度越大- 高浓度的产品粘稠度更高- 温度变动。温度越高,产品越粘稠是否所有的Matrigel ® Matrix产品都可以支撑hESC/hPS培养?
可以,但是Corning® Matrigel® hESC-Qualified Matrix (Cat. No. 354277) 能保证培养的一致性,重现性和可靠的性能
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