PBS缓冲液怎么选?
大家好!今天我们来聊聊生物化学实验中常用的PBS缓冲液。首先,PBS有多种类型,主要区别在于磷酸盐浓度和是否含有钾离子。以下是一些常见的PBS类型: 1PBS(
大家好!今天我们来聊聊生物化学实验中常用的PBS缓冲液。
首先,PBS有多种类型,主要区别在于磷酸盐浓度和是否含有钾离子。以下是一些常见的PBS类型:
1×PBS (0.01M磷酸盐,无菌):经过0.1 μm过滤除菌,适用于组织或细胞的洗涤、其他试剂的配制以及细胞实验的稀释液等。对于大部分客户来说,0.01M磷酸盐,无菌可以满足使用要求。但是,如果需要较长时间孵育,0.0067M磷酸盐,无菌 表现会更好一些。
PBS (0.0067M磷酸盐,无菌):适用于一些生物化学研究,作为常用溶剂。对于少部分细胞,短时孵育的情况下,0.0067M磷酸盐,无菌优于0.01M磷酸盐,无菌。
PBS (0.01M磷酸盐,不含钾离子):可用于清洗样本、配制试剂等,以及ELISA、WB、IHC、IF等免疫相关实验中的漂洗操作。适用于一些对磷酸盐浓度有特定要求且不需要钾离子参与的实验。
此外,对于大部分WB蛋白指标来说,PBST和TBST是可以通用的。但在检测磷酸化蛋白时,PBST可能会有点小麻烦。一方面,磷酸盐会干扰碱性磷酸酶结合的抗体,还会增加磷酸特异性抗体的背景信号(不过对HRP标记的抗体没影响);另一方面,磷酸化特异性抗体可能会和PBST中的磷酸盐结合,导致检测到的信号降低。就像有时候抗体孵育缓冲液从TBST改成PBST,可能条带就会变浅甚至消失(在其他条件都不变的情况下)。
因此,在选择缓冲液时,大家要根据具体情况仔细考虑哦。