转录因子结构域的鉴定

转录因子结构域的鉴定

所有转录因子至少包括两个结构域，即DNA结合域和转录激活域。此外，很多转录因子还包含一个介导蛋白质―蛋白质相互作用的结构域，最常见的是二聚化结构域。对于这些执行特定功能的结构域的研究也非常重要。对于调节因子功能结构域的鉴定，将有利于更好的了解转录因子的作用机制，并可以为操纵基因的表达提供更丰富的理论依据，以达到实验或治疗目的。

对于蛋白质来说，可以利用缺矢突变分析作为出发点，提供与调控蛋白结构域总体定位相关的信息。一旦缺失分析鉴定出了潜在的目的结构域，将对该区域进行结构域交换分析或(和)定点诱变分析。

在结构域交换分析中，一个转录因子的结构域被替换成其他蛋白的结构域，产生具有新的生物学功能的嵌合调节因子。

定点诱变分析是蛋白质中的特定氨基酸单个或成簇突变。该技术在进一步研究基因的结构与功能，以及通过使特异的氨基酸发生改变来获得突变体蛋白质方面有重要的作用。利用定点诱变分析可以鉴定结构域中功能所需的确切氨基酸。对蛋白质进行定点诱变主要有两种方法：①丙氨酸置换法，丙氨酸因为疏水性小，侧链碳原子少，因此能作为侧链截短或丧失接触突变的类似物；②基团置换法，用带有突出侧链的氨基酸替代野生型残基的位置，如将Arg变成Asp，这种突变既可以消除原先的接触，又可以在空间上或化学上破坏蛋白质之间的相互作用。通过上述突变后的蛋白质，可以进一步观察其对DNA的结合活性和转录激活功能的改变。