金黄色葡萄球菌检验

1 主题内容与适用范围

本文规定了食品中金黄色葡萄球菌的检验方法。

本文适用于航空食品的检验。

2 设备和材料

吸管（1ml、10ml）、恒温培养箱（36±1℃）、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等

3 培养基和试剂

普通肉汤培养基、胰蛋白胨大豆肉汤、Baird－Prker琼脂平板、缓冲蛋白胨水（BP）、凝固酶试验冻干血浆

4 检验程序（非选择性增菌法）

金黄色葡萄球菌检验程序如下：

检样25g+225mlBP胨水

10ml匀液+10ml双料胰胨肉汤

上述混合液+20ml20％NaCl单料胰胨肉汤

36±1℃ 2h

B-P平板

36±1℃ 24h

36±1℃ 48h 挑可疑菌落，移种到肉汤培养基

36±1℃ 24h

观察溶血

涂片染色

凝固酶试验

报告

5 操作步骤

5.1 称取25g固体样品；吸取25mL液体样品，加入225mLBP胨水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。

5.2 吸取10mL上述混悬液，接种于10mL双料胰蛋白胨大豆肉汤中，置36±1℃培养2h。

5.3 再加入20ml 含20％NaCl的单料胰蛋白胨大豆肉汤，置36±1℃培养24±2h。

5.4 划线转种2个表面干燥的Baird－Parker琼脂平板上，36±1℃培养46±2h。

5.5 挑取可疑菌落移种到肉汤培养基中，置36±1℃温箱培养24h。

5.6 取肉汤培养物0.3ml同0.5ml凝固酶试验冻干血浆于8mm*100mm试管内充分混合，置36±1℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察6h，以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动为阳性。试验中需同时做已知阳性和阴性对照。对可疑结果，应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验。

5.7 本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5～1μm。

在Baird－Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。

5.8 报告结果

如发现有凝固酶试验阳性的菌落，即报告1g(ml)食品中有金黄色葡萄球菌存在，否则为阴性。 注：本文参照SN0172-92《出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法》