植物制片的一般原理与方法

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第一章 植物 制片的方法及准备 植物制片技术是植物显微技术课的一个重要组成部分，在有关植物形态建成、植物杂交 育种、作物病虫害防治、药用植物的培育和鉴别以及林木材性鉴定等多方面的研究和教学工作中，都需要应用显微制片技术，由于各种作物器官的性质差异以及研究目的的不同，就需要不同的制片方法，但因限于学时及篇幅，本书仅根据常用的基本原理及教学中行之有效的方法加以介绍。 第一节植物制片的基本要求与主要制片方法 植物内部结构不能用大而厚的组织块置于显微镜 下观察，必须进行制作切片，才能供显微镜下观察应用。 石蜡（或徒手）切片，是将植物切成薄的材料，按下列主要步骤与要求制成永存切片。 1.采样：材料的选择与分割 2.杀生、固定与器皿清洗 3.冲洗（有的不经此步） 4.脱水（各级酒精） 5.透明 6.渗透（例如浸蜡） 7.包埋（石蜡包埋） 8.切片（切片机或徒手切片） 9.粘片 10.烘片 11.脱包埋剂（石蜡） 12.经各级酒精（脱水） 13.染色 14.分色 15.脱水 16.透明 17.封藏成永存片 从上述主要环节来看，首先将材料加以处理（1、2、3项），第二步进行制片基础的处理工作（4、5、6、7项），在保证质量完成这两类工作基础上，方可顺利完成切片工作（包括8、9、10项），也就是说切出符合规格的薄片来，然后再对组织进行染色、脱水、透明等一系列工作，才可制成透明清晰、染色鲜艳、适合显微镜观察摄影，并作教学、科研长期保存的永存片。其详细制片过程与方法，在以后章节内加以介绍。 通常制片分两大类型。 第二节 溶液的配制 （一）各级酒精浓度的配制 在植物制片中常用各级酒精，一般以95%酒精来配制，为节约起见，避免用无水酒精来配制各级酒精（表1一2）。 在实验中使用酒精量较大，每次以量筒量液花费时间多，可在500ml细口瓶有玻璃塞的瓶上贴一条宽1cm与瓶等长的白色纸条，仅在第一次用量筒量酒精与蒸馆水的用量处划上刻度，以后每当瓶内溶液用完，即以纸条上刻度分别倒入酒精和蒸馆水的各用量即可。 （二）低浓度溶液配制 制片中染色液绝大多数为此类溶液。如1%番红水溶液，即为番红1g溶于l00mL的蒸馏水中；又如0.5%曙红（伊红）酒精溶液为0.5g曙红溶于l00mL的95%酒精中。 其他如重量百分比浓度、摩尔浓度、克当量浓度等溶液的配制，在附录5中介绍。 第二章 石蜡法制片原理与方法 第一节 材料的选择与分割 材料的选择和切割是根据研究目的而决定的，应注意以下诸条件。 1.应选取新鲜、无病虫害并具代表性的材料。 2.先作徒手切片或剥离检查，决定适宜的材料立即固定处理。 3.注意按季节及植物生长发育的不同阶段而选取材料。 4.材料大小要适当，如根的直径在5mm以内的，可切取5-10mm长的小段，直径在5mm以上者可纵分割成1/2或1/4，横切厚度约3-5mm；若以滑走切片机切片，长度约在2-3.5cm。 叶的切取切成2-5mm，若叶较宽可切10mm的长条，叶面切取的部位，以研究者的目的灵活选取。切取材料必须使用新刀片，刀口和叶面垂直迅速切割下来。 花、果的切割：花药和雄蕊切割，花芽和幼穗的切割，须剥去外部鳞片及叶鞘和其他部分，切去多余部分再入固定液，有的花序则需去掉外方苞片，一般小的花不经切割可投入固定液，大花果才进行分割处理。