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PCR产物的平末端克隆
原理靶基因经 PCR 扩增，样品进行必要的纯化回收后，接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶
2024-05-20 152 -
克隆化的PCR产物连入T载体
原理由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上，这种 T 载体有与 A 碱基互
2024-05-20 186 -
脉冲场凝胶电泳制备DNA（酵母完整DNA的分离）
原理制备用于电泳的酵母 DNA，先用酶破坏酵母细胞胞壁，然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬，制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液，以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法
2024-05-20 114 -
脉冲场凝胶电泳制备DNA（哺乳动物细胞和组织DNA的分离）
原理本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要，DNA 也可以从哺
2024-05-20 105 -
聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收（压碎与浸泡法）
原理从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 的标准方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介绍的“压碎与浸泡”技术。洗脱下来的 DNA 通常不含有酶
2024-05-20 133 -
聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测
原理丙烯酰胺凝胶电泳分离的放射性 DNA 条带可用放射自显影的方法检测。含有放射性 DNA 的聚丙烯酰胺分析凝胶，在放射自显影前通常要固定和干燥。然而，若要从凝
2024-05-20 127 -
低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收（用琼脂糖酶消化）
原理可用琼脂糖酶消化的方法从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA ( Bumeister and lehrach 1989)。在这种方法中，琼脂糖酶使琼脂糖多聚体水解
2024-05-20 107 -
长距离PCR
原理在标准 PCR 反应条件下，PCR 扩增 DNA 片段的长度一般为 1~2 kb，这种扩增能力对许许多多常规的 DNA 分子操作技术要求来说是已经足够了（如
2024-05-20 107 -
cDNA宏阵列方法分离拟南芥的臭氧应答基因实验
材料与仪器步骤##一、 cDNA 宏阵列的样品制备培养基： I : 2 (V7 V ) Gamborg B5 培 养 基（GibcoBRL， Rockville
2024-05-20 109 -
用交换反应进行5'突出端DNA分子的磷酸化
原理T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5&#
2024-05-20 116 -
锚定酶消化cDNA实验
材料与仪器溶液与缓冲液 引物试剂盒 MPC-E PCR仪 Gene PulserII 型系统步骤实验方案 A1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA2.在 37
2024-05-20 100 -
通过 cDNA宏阵列和基因表达谱检测 环境毒物的毒理效应实验
材料与仪器步骤一.材料1.扩增和制备克隆（1）甘 油 保 存 的E.coli, 质 粒 含 有 目 标 cDNA 插入片段。（2）Tag 聚合酶和缓冲液（New
2024-05-20 106 -
去磷酸化的平端或5'凹端DNA分子的磷酸化
原理在 T4 多核苷酸激酶的正向反应中，带有平端、5' 凹端或分子内切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子标记效率低。材料与仪器T4 噬菌体
2024-05-20 97 -
含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化
原理本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 32P
2024-05-20 121 -
用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化
材料与仪器牛小肠碱性磷酸酶 虾碱性磷酸酶 蛋白酶 K 限制性内切核酸酶 DNA 样品氯仿 EDTA 乙醇 酚 氯仿 SDS 醋酸钠 TE Tris-Cl CIP
2024-05-20 116
