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  • 基于错配化学裂解法检测突变基因

    基于错配化学裂解法检测突变基因

    简介英文名:chemical cleavage of mismatch , CCM错配化学裂解法与其他方法相比,能分析 2kb 范围内的较长片段。原理错配化学裂

    2024-05-18 82
  • 基于单链构象多态性检测突变基因

    基于单链构象多态性检测突变基因

    简介英文名: single-strand conformation polymorphism, SSCP单链构象多态性分析是因为短于 400 碱基长的单链 DN

    2024-05-18 73
  • SDS-蛋白酶K-苯酚抽提质粒DNA

    SDS-蛋白酶K-苯酚抽提质粒DNA

    简介SDS-蛋白酶K-苯酚抽提法提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分

    2024-05-18 84
  • SDS-蛋白酶K-苯酚抽提组织细胞DNA

    SDS-蛋白酶K-苯酚抽提组织细胞DNA

    简介SDS-蛋白酶K-苯酚抽提法提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离

    2024-05-18 97
  • 琼脂糖凝胶电泳

    琼脂糖凝胶电泳

    原理用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受

    2024-05-18 92
  • Southern印迹技术

    Southern印迹技术

    简介印迹杂交是指将待测核酸片段结合到一定的固相支持物上,然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术(Southern blot)是将D

    2024-05-18 122
  • 定量PCR

    定量PCR

    原理定量PCR(即时聚合酶链锁反应,Real-time Polymerase Chain Reaction,简称 Real-time PCR、即时PCR),又称

    2024-05-18 64
  • 原位缺口平移技术

    原位缺口平移技术

    简介原位切口平移技术又称为原位缺口翻译(in situ nick translation)。它最早用于研究DNA体外复制,其后又扩展至研究染色体、培养细胞与组织

    2024-05-18 86
  • 杆状病毒表达系统的建立

    杆状病毒表达系统的建立

    简介杆状病毒是双链 DNA 病毒,主要感染昆虫,也感染体外昆虫细胞系,对人畜无毒害。苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)是目前宿主最广、应用最多的杆状病毒

    2024-05-18 77
  • 验证候选基因以筛查表型

    验证候选基因以筛查表型

    简介考虑到筛选过程可能很复杂,并且分析产生了一个候选基因的排序列表, 有必要验证已识别的候选基因对表型的干扰。为了验证,每个针对候选基因的 sgRNA 都可以单

    2024-05-18 89
  • 收集基因组DNA用于筛选分析

    收集基因组DNA用于筛选分析

    简介利用 CRISPR 进行基因组敲除和转录激活的筛选[以筛选 BRAFV6OOE (A375)细胞系中对 BRAF 抑制剂维莫非尼(PLX)有抗性的基因为例]

    2024-05-18 94
  • 慢病毒转导和筛选

    慢病毒转导和筛选

    简介根据所需的用途,sgRNA 库可以由慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒(AAV)提供。慢病毒和逆转录病毒整合到基因组中,而腺相关病毒不整合, 因此对于筛选,腺相

    2024-05-18 87
  • 慢病毒产生和滴度

    慢病毒产生和滴度

    简介根据所需的用途,sgRNA 库可以由慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒(AAV)提供。慢病毒和逆转录病毒整合到基因组中,而腺相关病毒不整合, 因此对于筛选,腺相

    2024-05-18 101
  • 二代测序确定 sgRNA 文库的 sgRNA 分布

    二代测序确定 sgRNA 文库的 sgRNA 分布

    简介插入缺失率可以用 SURVEYOR 核峻酶测定法或新一代测序技术测定,新一代测序技术更适合对大量 sgRNA 作用杷标位置进行采样。材料与仪器器材:Illu

    2024-05-17 108
  • 混合的 sgRNA 库的扩增

    混合的 sgRNA 库的扩增

    简介在整个 sgRNA 文库克隆和扩增过程中,要尽量减少任何可能影响筛选结果的潜在偏差。例如,在混合的 Oligo 文库合成过程的初始扩增中,应该限制 PCR

    2024-05-17 87