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单层细胞如何用胰蛋白酶处理?
下述方案描述的是采用胰蛋白酶处理细胞,进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次,在传代的前一天换培养液;但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞
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都说RNAi很容易降解,转染效率很低,是真的吗?
RNAi就是利用降解双链RNA的酶系统,人工引入一段和目标RNA互补的序列,这样,在细胞内形成双链RNA,诱发降解机制,使目标RNA降解,无法被进一步翻译。在转
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做好RNA转染的几点建议
1.纯化RNA在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,
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shRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下shRNA转染步骤(24孔板)1.提前1天细胞种植贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇
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如何解决病毒感染细胞效率低的难题?
病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 使用病毒感染增强剂Envirus-LV来提高感染效率。 病毒感染
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细胞培养该不该加抗生素?
细胞有没有正常生长,或细胞是否污染,是细胞培养的关键。虽然,顺利的时候,细胞培养起来很简单,可不顺的时候就会出现各种问题——-细胞污染啦、细胞生长缓慢啦、细胞形
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siRNA转染常见问题及解决方案
1. RNA与转染试剂比例不佳由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化
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细胞生长速度非常快,现在在密度20-30%时就开始转染,但是到了60小时后细胞密度已经非常高,几乎没有空隙。如果继续等待,是否会导致细胞状态不佳,从而影响到实验中蛋白的表达效果。
细胞密度确实会影响转染效率和蛋白表达。如果细胞密度过高,可能会导致以下问题:营养和废物积累:高密度会导致培养基中的营养迅速消耗,废物积累增加,这会影响细胞的健康
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质粒DNA转染实验效率影响因素
1,质粒的构建:启动子的选择启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。2, 质粒的大小和质量
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请问共转染的两种质粒需要选择不同载体吗
在基因转染实验中,共转染的两种质粒通常不一定需要选择不同的载体,但有一些情况下选择不同的载体可能会更有优势:同源重组和重复序列问题:如果两个质粒使用相同的载体序
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质粒DNA转染注意事项
1.启动子的选择启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。2.质粒的大小和质量线性化还是超螺
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慢病毒感染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板提前一天种植细胞,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。感染实验⑴将EnvirusTM-LV用
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哪种RNA转染试剂效果更好? Turbofect or EntransterTM-R4000?
近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和 EntransterTM-
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免疫细胞的制备方法和注意事项
随着免疫细胞生物学和分子生物学的快速发展,免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗和手术后辅助治疗的重要手段之一。过继免疫治疗(adoptive cellular imm
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如何选择稳定转染的筛选抗生素?
稳定转染和瞬时转染,细胞转染的步骤基本相同,只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天,故在转染12~72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了