药物对动物体内溶血素含量的影响实验-细胞培养技术

药物对动物体内溶血素含量的影响实验测定药物对小鼠溶血素的影响，并用SPSS软件进行统计学分析。

材料与仪器

小鼠
绵羊红细胞 补体 都氏试剂 人参 氢化可的松注射液
微量加样器 恒温振荡器 紫外可见分光光度计

步骤

1.  实验分组及处理昆明种小鼠80只，体重18~22 g，随机分为8组，即空白对照组、正常辽宁人参灌胃组、正常吉林人参灌胃组、正常朝鲜人参灌胃组、免疫低下模型对照组、免疫低下辽宁人参治疗组、免疫低下吉林人参治疗组和免疫低下朝鲜人参治疗组，每组10只，雌雄各半。

2.  饲养动物3天后，免疫低下模型组和三地人参免疫低下治疗组小鼠皮下注射氢化可的松注射液，70 mg/kg（体重），1次/d，连续1周。

3.  待模型完成后，空白对照组和免疫低下模型组正常饲养，不限饮食；正常三地人参灌胃组和三地人参免疫低下灌胃组分别以三地人参水煎剂灌胃，5 g/kg（体重）/d（即100%煎剂0.2 mL/只），1次/d，连续2周。

4.  待治疗完成后小鼠眼球取血分离血清。

5.  血清溶血素含量测定用生理盐水将绵羊红细胞（SRBC）水洗3次（1000～2000 r/min，5 min），弃去上清液，3∶5（V/V）用生理盐水把SRBC稀释为2x109个/mL。

6.  取材前4天小鼠腹腔注射配制好的SRBC 0.2 mL

（1）取材当日小鼠摘眼球取血、分离血清，并将血清稀释500倍。

（2）取1 mL 稀释后的血清加入反应管，再加0.5 mL SRBC，置冰浴中，每管加入1 mL 补体。

（3）将反应管移至37℃水浴中，10分钟后再移至冰浴中。

（4）冰浴后2000 r/min 离心10 min，取上清1 mL，加入3 mL 都氏试剂混匀，10 min 后用分光光度计（540 nm）测定吸光度。

7.  测定实验用的SRBC半数溶血时的吸光度值，并取同实验用的SRBC 0.25 mL，加4 mL 都氏试剂，摇匀，10 min后 用分光光度计测定吸光度，作用为半数溶血对照。

8.  换算公式如下：样品HC50=（样品吸光度值x稀释倍数）/SRBC半数溶血时的吸光度。

9.  统计分析各组数据均采用（x ± s）表示，采用SPSS17.0统计软件进行方差分析。

注意事项

血液应现取现用。