PAS染色的实验步骤全攻略

一、前期准备

在开始PAS染色之前，我们需要做好以下准备工作：

·选择适当的组织样本：根据实验目的，选取含有目标多糖类物质的组织样本。

·固定与切片：将组织样本进行固定、脱水、包埋和切片，得到适合染色的组织切片。

·准备染色试剂：准备好所需的染色试剂，包括高碘酸、Schiff试剂、苏木精等。

二、PAS染色步骤

→脱蜡与水化：将组织切片放入二甲苯中脱蜡，然后依次经过梯度酒精进行水化。

→高碘酸氧化：将切片放入高碘酸溶液中，进行氧化反应，使多糖类物质中的羟基氧化成醛基。

→Schiff试剂染色：将氧化后的切片放入Schiff试剂中，醛基与Schiff试剂中的亚甲基蓝发生反应，形成紫红色产物。

→分化与漂洗：用硫酸亚锡溶液对切片进行分化，去除多余的染色物质，然后用自来水漂洗。

→苏木精复染：用苏木精对切片进行复染，使细胞核呈现蓝色。

→脱水、透明与封片：将切片依次经过梯度酒精脱水、二甲苯透明，最后用中性树胶封片。

三、注意事项

→控制染色时间：高碘酸氧化和Schiff试剂染色的时间要适当，过长或过短都会影响染色效果。

→保持试剂新鲜：高碘酸和Schiff试剂容易失效，需定期更换新试剂。

→避免污染：操作过程中要保持切片和试剂的清洁，避免污染影响染色结果。

四、进阶技巧

●优化染色条件：根据组织类型和染色需求，调整高碘酸浓度、氧化时间和Schiff试剂染色时间等条件，以获得最佳染色效果。

●联合其他染色方法：PAS染色可以与其他染色方法（如免疫组化染色）联合使用，以同时检测多糖类物质和其他生物分子。