LCM 实验
原理采用激光切割等技术将生物样品片子等不易观察和检测的样品进行处理的技术，具有简单快捷，效率高等特点。材料与仪器RNaseAwayRNaseAway胶带 LCM
原理
采用激光切割等技术将生物样品片子等不易观察和检测的样品进行处理的技术，具有简单快捷，效率高等特点。
材料与仪器
RNaseAway
RNaseAway
胶带 LCM 棺子 去湿器 分液器 镊子 LCM 系统 Pix Cell Ⅱ 无 RNA 酶的管子
RNaseAway
胶带 LCM 棺子 去湿器 分液器 镊子 LCM 系统 Pix Cell Ⅱ 无 RNA 酶的管子
步骤
一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
RNaseAway(7000，MolecularBioProducts，SanDiego，CA)
2. 特殊设备.
胶带
LCM 棺子（ArcturusEngineering〉
去湿器
分液器，P200,P2
镊子
LCM 系统
Pix Cell Ⅱ(ArcturusEngineering)
无 RNA 酶的管子，0.5 ml
二、方法
根据生产商操作指南，简述如下。
1. 放样品片子于 Pix Cell Ⅱ 设备的转台上。
2. 手动定位片子以定位转移区域。
3. 打开真空卡盘使片子吸住。
4. 把 LCM 帽子通过旋转放置臂放到片子上。
5. 旋转激光连锁开关，等待10s。
6. 按下激光按钮。
7. 先进行高倍放大调节焦点。
激光束应定位于视野的中央。通过显微镜的激光束肉眼不能看见，所以当激光束开始工作时应当通过显示屏来进行微分离。在组织区域外选择最小的点（7.5um) 进行测试脉冲以校正激光束的焦距。
8. 用操纵杆移去目标之外的其他组织和细胞。
LCM 之后，LCM 帽子应当立刻移走，并插入到无 RNA 酶的含有 RNA 提取溶液的0.5 ml 管中。
1. 缓冲液、溶液和试剂
RNaseAway(7000，MolecularBioProducts，SanDiego，CA)
2. 特殊设备.
胶带
LCM 棺子（ArcturusEngineering〉
去湿器
分液器，P200,P2
镊子
LCM 系统
Pix Cell Ⅱ(ArcturusEngineering)
无 RNA 酶的管子，0.5 ml
二、方法
根据生产商操作指南，简述如下。
1. 放样品片子于 Pix Cell Ⅱ 设备的转台上。
2. 手动定位片子以定位转移区域。
3. 打开真空卡盘使片子吸住。
4. 把 LCM 帽子通过旋转放置臂放到片子上。
5. 旋转激光连锁开关，等待10s。
6. 按下激光按钮。
7. 先进行高倍放大调节焦点。
激光束应定位于视野的中央。通过显微镜的激光束肉眼不能看见，所以当激光束开始工作时应当通过显示屏来进行微分离。在组织区域外选择最小的点（7.5um) 进行测试脉冲以校正激光束的焦距。
8. 用操纵杆移去目标之外的其他组织和细胞。
LCM 之后，LCM 帽子应当立刻移走，并插入到无 RNA 酶的含有 RNA 提取溶液的0.5 ml 管中。
注意事项
LCM 的工作间应当干净、干燥、没有 RNA 酶。分液器、镊子以及其他设备应当用去 RNA 酶溶液洗过。如果湿度高，去湿器也是需要的。为了得到好的样本，PixCelin 的激光束必须能合适地聚焦。因为组织样品厚度的不同会影响激光的聚焦，所以应当使组织样品厚度均一。
常见问题
1. 每一张切片使用LCM切取0.1cm2和0.3cm2的组织各两个重复，（不染色的切法：使用染色的切片作为对照切下相邻不染色的切片）。
2. 切下的组织片置于1.5mL离心管中，-80℃保存。
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