基于 5'- 酸酶等位基因鉴别法分析 SNP 分型

简介5'- 酸酶等位基因鉴别法或称 TaqMan 法是一种 PCR 为基础的 SNP 基因分型手段。TaqMan 技术依赖 Taq 酶的 5'

简介

5'- 酸酶等位基因鉴别法或称 TaqMan 法是一种 PCR 为基础的 SNP 基因分型手段。TaqMan 技术依赖 Taq 酶的 5'→ 3' 外切核酸酶活性，在 PCR 延伸过程中降解与互补靶序列杂交结合的双重标记探针，该探针降解的过程中，荧光基团释放并与淬灭基团分离，最终释放出荧光信号，进而检测标记信号。

原理

基于 5'- 酸酶等位基因鉴别法分析 SNP 分型的基本原理是基于特异性的 Taqman 探针，该探针由共价结合在 5'- 端寡聚核酸探针的荧光基团和 3'- 端的淬灭基团组成，淬灭基团与荧光基因离得较近时，即可淬灭所有荧光基团发射的荧光；而探针降解的过程中，荧光基团释放并与淬灭基团分离，最终释放出荧光信号，被检测出来。同时检测过程中，引物会扩增包含 SNP 位点在内的 DNA 序列，SNP 位点处的靶序列完全互补配对的探针在退火时稳定杂交，而与等位基因特异性探针并不完全互补的探针则由于其融解温度较低，不能有效杂交，这样可以对 SNP 分型位点进行有效区分。

材料与仪器

样本的基因组 DNA

步骤

1）样本基因组 DNA 的提取与制备

2）Taqman 探针的 PCR 产物检测

3）SNP 位点的分型分析

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