动物组织番红固绿染色步骤

一、番红固绿染色原理与实验准备

番红固绿染色原理：改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。

1、实验仪器准备：组织脱水仪、石蜡或冰冻包埋仪、组织切片机、组织摊片/烤片机、光学显微镜/玻片扫描仪等

2、实验试剂准备：番红O-固绿软骨染色液、中性树胶、无水乙醇、二甲苯

二、番红固绿染色实验步骤（以软骨组织为例）1、组织样本脱蜡

（1）70℃烤片30 min；

（2）二甲苯（I）中脱蜡10 min；

（3）二甲苯（II）中脱蜡10 min；

（4）100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

（5）100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；

2、组织样本水化

（1）95%乙醇中水化5 min；

（2）85%乙醇中水化5 min；

（3）75%乙醇中水化5 min；

（4）蒸馏水中水化待用；

3、染色

（1）入新鲜配制的Weigert染液染色3-5min；

（2）流水冲洗2 min；

（3）酸性分化液分化15s；

（4）蒸馏水洗10min；

（5）在固绿染色液内浸染5min；

（6）快速用弱酸溶液洗涤切片10-15s，以便去除残留的固绿；

（7）入Saftanin O stain内浸染5min；

4、脱水

（1）95%乙醇脱水2-3s；

（2）无水乙醇脱水2-3s；

（3）无水乙醇脱水1 min；

5、透明

（1）二甲苯（I）透明2 min；

（2）二甲苯（II）再次透明2 min；

6、封片镜检

（1）在石蜡切片的中央滴加一滴中性树胶，盖上盖玻片封固。

（2）显微镜下拍照，或在组织扫描仪下进行玻片的全景扫描。