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单细胞悬液制备方法—下

2025-02-07 细胞技术加入收藏

一、单细胞悬液组织样本1、常见的组织类型：⼩⿏脾脏、肝脏、⼼脏、肺脏、脑组织、肿瘤组织、⼈肿瘤组织、⽪肤组织等2、传统组织处理⽅法：机械法：⽹搓法、研磨法3、适

一、单细胞悬液组织样本

1、常见的组织类型：⼩⿏脾脏、肝脏、⼼脏、肺脏、脑组织、肿瘤组织、⼈肿瘤组织、⽪肤组织等

2、传统组织处理⽅法：机械法：⽹搓法、研磨法

3、适⽤样本类型：脾脏、淋巴结、胸腺

二、各样本处理方法操作步骤

1、⽹搓法

（1）将300⽬尼龙⽹扎在⽆菌的⼩烧杯上；

（2）把剪碎的组织放在⽹上，以眼科镊⼦轻轻搓组织块，边搓边加⽣理盐⽔冲洗，直到将组织搓完；

（3）收集细胞悬液于离⼼管中，1500rpm离⼼5 min；弃上清液，加红细胞裂解液重悬沉淀，室温作⽤5 min，加等体积的PBS中和后，1500rpm离⼼5 min，弃上清，⽤PBS洗涤⼀次，再⽤PBS重悬，细胞计数后即可使⽤。

2、研磨法

（1）先将组织剪成1-2mm⼤⼩组织块；

（2）放⼊组织研磨器中，转动研棒，研⾄匀浆；

（3）加⼊10ml⽣理盐⽔，冲洗研磨器；

（4）收获细胞悬液，并经200⽬尼龙⽹过滤，1500rpm离⼼5 min；

（5）弃上清液，加红细胞裂解液重悬沉淀，室温作⽤5min，加等体积的PBS中和后，1500rpm离⼼5 min，弃上清，⽤PBS洗涤⼀次，再⽤PBS重悬，细胞计数后即可使⽤。

3、酶解法：胰蛋⽩酶类、胶原酶、溶菌酶、弹性蛋⽩酶

适⽤样本类型：肝脏、肾脏、⼼脏、肺脏、脊髓、脑、肠道、⽪肤、肿瘤等；

三、组织样本单细胞悬液制作操作步骤

1、先将组织剪成泥状。

2、⽤胰蛋⽩酶或胶原酶消化组织块。

胰蛋⽩酶适⽤于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上⽪、肝、肾等组织。胰蛋⽩酌⼯作浓度⼀般为0.1%—0.5%。对于纤维较多的组织或较硬的癌组织常⽤0.25%胶原酶，胶原酌对组织中胶原蛋⽩类结构消化作⽤强，它仅对细胞间质有消化作⽤⽽对上⽪细胞影响不⼤。胶原酶常⽤浓度为0.1—0.3ug/ml，⽤⼤于组织量30—50倍的胰蛋⽩酶液或胶原酶液在37°C，摇床上消化组织，消化时间的长短依组织类型⽽定，⼀般来说，胰蛋⽩酶油作⽤20—60 min，胶原酶需1—4h左右，⼀般还会加⼊DNA核酸内切酶。