SNP检测方法总结

SNP标记具有很大的发展潜力，被广泛应用于生物、农学、医学、生物进化等众多领域，在分子遗传学、药物遗传学、法医学以及疾病的诊断和治疗等方面发挥着重要作用，现在我们就来看看除了最常用的三种检测方法，其他的检测SNP的方法：

1、分子信标法

分子信标是一段双标记的寡核苷酸探针，其5’末端和3’末端分别标记荧光基团和淬灭基团，且探针5’端和3’端的部分碱基可互补配对，从而形成茎环结构，使得荧光基团和淬灭基团相互靠近而荧光信号较低。分子信标的环状结构部分包含SNP检测位点，当模板与分子信标环状结构的核酸序列完全匹配时，分子信标可与模板杂交形成伸展状态，从而导致荧光基团和淬灭基团的空间距离拉大，荧光信号增强，因此可被仪器检测，并确定SNP位点。

2、高分辨率熔解曲法

高分辨熔解曲线分析技术(high-resolution melting analysis,HRM)是通过特定染料与扩增后产物结合后形成特定的熔解峰进行分析检测的方法，其使用的特料为饱和荧光染料，具有更强的DNA结合能力，且不影响PCR扩增，在DNA解链过程中也不会发生重排，使得熔解曲线具有更高的分辨率。

3、CAPS法

酶切扩增多态性序列(Cleaved Amplified Polymorphic Sequence,CAPS)，又称限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)，是PCR技术与RFLP技术相结合的检测方法。该方法基于DNA片段在酶切位点上的碱基变异，采用相应的限制性内切酶，对该DNA片段的PCR扩增产物进行酶切，从而产生不同的电泳图谱，由此确定SNP位点的碱基类型。但是CAPS仅能检测位于酶切位点处的SNP，对于酶切位点以外的SNP则无法检测。

4、SNaPshot法

SNaPshot是美国应用生物公司(ABI)开发的一种商业技术，是基于荧光标记的单碱基延伸原理，而建立起来的分型技术，该方法也被称为小测序。其引物设计的关键是延伸引物的3’末端应紧挨着SNP位点，同时对不同SNP位点可设计不同长度的延伸引物，这样便可通过引物长度区分SNP位点。

5、质谱法

质谱法是基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)的检测方法，其检测过程中，需通过激光激发DNA分子片段,再利用飞行时间判断DNA片段的分子量大小，从而确定SNP位点。其检测原理同样使用了单碱基延伸技术，在多重PCR扩增时，其扩增产物将在SNP位点上终止延伸，形成不同分子量的检测产物，再利用质谱分析获得图谱，而不同分子量的延伸产物，在其对应的分子量位置上可查看检测峰图，由此确定SNP位点。

6、KASP法

KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)是基于引物末端碱基的特异性匹配对SNP进行检测的方法，该方法在引物和探针设计上与常规荧光PCR不同，首先需针对SNP的等位基因设计两条对应的上游引物，引物3’末端分别位于各自的SNP位点上，同时引物5’端各自带有一段独特的标签序列，而下游引物则是一条常规设计共用的引物；其次，设计两条与上游引物标签序列一致的荧光探针，探针的5’端分别标记不同的荧光基团，同时对应于荧光探针设计各自互补配对的淬灭探针，并在淬灭探针的3’端标记淬灭基团。由此，在扩增未开始时，荧光探针与淬灭探针结合，荧光基团与淬灭基团相互靠近，而无法产生荧光信号。当设计的上游引物中有一条或两条与模板完全匹配时，则可启动扩增，其扩增产物再结合下游引物进行扩增，则形成含有标签序列的DNA片段；该带有标签序列的DNA片段可与荧光探针结合，而荧光探针3’端可作为引物启动扩增，最后形成带有荧光标记的扩增产物，而且荧光探针对应的淬灭探针则在扩增过程中被切割掉，从而使得扩增过程的荧光信号增强，可对SNP位点进行检测。

7、基因芯片法

基因芯片(gene chip)是指将大量针对SNP的寡核苷酸探针高密度地固定在一固相支持物表面，从而形成多重寡核苷酸微阵列，而经荧光染料标记后的待测DNA片段，与芯片上固定好的探针阵列进行杂交反应，核酸片段只与其序列完全互补配对的探针杂交，不与含有单个错配碱基的序列杂交，从而将目标序列固定下来，再通过清洗去除非目标片段，最后通过扫描检测芯片上的荧光信号，由此确定SNP位点。