贴壁细胞、悬浮细胞、组织切片衰老实验操作步骤

首先是贴壁细胞衰老检测的实验步骤：

1、吸除培养基，用PBS（或试剂盒里的细胞清洗液）洗涤细胞3遍。

2、吸取清洗液，加入固定液室温固定细胞15min。

3、吸去固定液，用PBS9（或试剂盒里的细胞清洗液）洗涤细胞3次。

4、吸去清洗液，加入37℃预热的染色液。37℃孵育3-16h或直至细胞呈现蓝色，可用保鲜膜封住培养皿以防止染色液的蒸发。

5、在光学显微镜下观察和计数，呈现蓝色的细胞为衰老细胞。如果不能及时观察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封边剂封片后4℃长期保存。

第二个就是悬浮细胞衰老检测的实验步骤：

1、收集细胞：离心收集待测的悬浮细胞，用PBS或细胞清洗液洗涤细胞三遍。

2、洗去清洗液：离心后吸去清洗液，加入固定液悬浮细胞，室温摇床上固定细胞15 min。

3、洗去固定液：用PBS或细胞清洗液洗涤细胞三次，再吸去清洗液。

4、加入37℃预热的染色液至悬浮细胞，37℃孵育3-16h或直到细胞呈现蓝色，最好把整个片子浸泡在染色液中，然后用保鲜膜封住器皿以防止染色液的蒸发。

5、取染好色的细胞，添加到载玻片或六孔板内。

6、在光学显微镜下观察和计数：呈现蓝色的细胞为衰老细胞。如果不能及时观察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封边剂封片后4℃长期保存。

最后就是组织切片衰老检测的操作步骤：

1、石蜡切片先按照常规的方法进行脱蜡和水化处理，如果样本是冰冻切片可以直接进行下一步。石蜡且切片的脱蜡我们可以参考以下的脱蜡步骤：

（1）脱蜡前，将组织切片于60℃恒温箱中烘烤2.5h；

（2）组织切片置于二甲苯中浸泡15 min；

（3）更换二甲苯后再浸泡15 min；

（4）无水乙醇中浸泡5 min；

（5）90%乙醇中浸泡5 min；

（6）80%乙醇中浸泡5 min；

（7）70%乙醇中浸泡5 min；

2、加入适当固定液，以充分覆盖住组织为宜，室温固定细胞15min

3、吸去固定液，用PBS（或试剂盒里的细胞清洗液）洗涤细胞3次。

5、在光学显微镜下观察和计数：呈现蓝色的细胞为衰老细胞。如果不能及时观察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封边剂封片后4℃长期保存。