细胞增殖检测的注意事项

一、MTT法检测细胞增殖注意事项：

1、MTT的配制：MTT对菌和光十分敏感，配制过程中注意无菌环境及避光，使用超净台配制时，可以将超净台的灯光先关掉。MTT具有致癌性，在配制的过程中，应注意防护，避免药物直接触碰皮肤。

2、细胞接种密度的确定：细胞密度控制在103-104之间。若密度太大，细胞对药物敏感性降低；若密度过小，则差异性太小。

3、血清的影响：高浓度的血清会对细胞的光吸收值长生影响，故细胞培养使用的血清浓度应该控制在10%以下。

4、设置凋零空和空白组，保证实验结果的准确性。

5、注意测试药物是否与MTT发生反应：某些具有氧化还原性质的药物，会与MTT发生反应，将MTT还原成为棕褐色沉淀，故如存在此类药物，应在加入MTT前，用PBS对细胞清洗。

6、终止培养，溶解结晶：去除上清时，勿将MTT结晶体吸走，操作慎重，以免影响吸光值。

二、CCK-8法检测细胞增殖注意事项

1、根据所培养细胞的种类和细胞数量来确定细胞培养时间。细胞培养1-4小时后，可先从培养箱中取出，目测或使用酶标仪观察染色程度，若染色不充分，再将细胞放入培养箱中继续培养。

2、保证培养箱和培养板中间孔的湿度。培养板中间孔的湿度可以使用PBS填充边缘孔的方法来解决。

3、添加CCK-8试剂时，速度要快，避免药剂在墙头上停留时间过长，对药物浓度产生影响。也可在加样前用培养基稀释CCK-8。

三、EDU法检测细胞增殖注意事项

1、加入含有Edu的培养基时，培养基的用量以没过细胞为适宜。

2、根据培养细胞种类不同，确定细胞生长周期，再进一步确定Edu培养基的培养时间，大多数细胞为2小时培育时间。

3、固定细胞前，使用PBS清洗未进入细胞DNA的Edu，一般清洗次数为1-2次，每次5分钟，也根据不同的细胞选择清洗强度，避免细胞流失，造成密度不同。

4、染色完成后，最好立即进行观察。如若条件限制，请4℃避光保存，保存时间不宜过长，不超过3天。