通过CsCl 等密度梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
原理CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚
原理
CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚克隆至质粒载体和产生用于原位杂交的探针。这种方法第二个优点是，由它所获得的噬菌体原种是高度浓缩的（大于 1011 cfu/ml)，在 4℃ 保存时，许多年后仍能保持它们的感染力。
材料与仪器
λ 噬菌体悬浮液
CsCl 乙醇
Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号 Beckman Ti50 或 SW50.1 转子或相当型号 皮下注射用针头
CsCl 乙醇
Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号 Beckman Ti50 或 SW50.1 转子或相当型号 皮下注射用针头
步骤
一、材料
1. 缓冲液和溶液
(1) CsCl（固体）
(2) CsCl 溶液
(3) 乙醇
2. 离心机和转子
(1) Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号
(2) Beckman Ti50 或 SW50.1 转子或相当型号，配有清亮的离心管（如 Beckman 超亮离心管）
3. 专用设备
皮下注射用针头（21号）
4. 载体和菌株
λ 噬菌体悬浮液
二、方法
1. 测定噬菌体悬浮液的体积，每毫升加入 0.5 g 固体 CsCl，搅拌混匀使其完全溶解。
2. 倒入足够量的 CsCl 分级梯度，使噬菌体悬浮液分成几个组分，每个梯度能容纳约 16 ml 噬菌体悬浮液。所需分级梯度的量等于亲水相的最终体积（步骤1），亲水相又被分成数份，每份为 0.4 X 离心管体积。用适合于 Beckman SW41 或 SW28 转子（或相当型号）的清亮塑料离心管（如 Beckman 超亮离心管)。
3. 在 ρ=1.50 g/ml 和 ρ=1.45 g/ml 两层界面的相应试管壁外侧，用永久性标签笔作上标记。
CsCl 分级梯度大约占超离管体积的 60%。比如，对一个能装 38 ml 的 Beckman SW28 试管（或相当型号），分级梯度由三种均为 7.6 ml 的 CsCl 溶液组成。平衡管装有同样密度的 CsCl 溶液。
4. 小心地将噬菌体悬浮液加至分级梯度上，4℃，87000 g ( 22000 r/min 于 Beckman SW28 转子中）离心 2 h。
5. 按下面的方法对离心管进行穿孔，以收集噬菌体颗粒。
(1) 用酒精仔细地擦去离心管外的油污，然后在离心管的外侧贴上 Scotch 胶带，与噬菌体颗粒带平齐。
胶带起到封条的作用，防止针头四周渗漏。
(2) 用 21 号皮下注射用针头（不需要注射针筒）穿过胶带刺入离心管，收集噬菌体颗粒带。
手指远离针头刺入方向，以免剌穿离心管。注意不要使梯度中其他带内物质污染噬菌体颗粒。这些带内含有细胞碎片和未装配的噬菌体成分。
6. 将噬菌体颗粒悬浮液装入适宜于 Beckman Ti50 或 SW50.1 转子（或相当型号）的超离管中，加入 CsCl 溶液（ρ=1.5 g/ml 于 SM 中)。4℃，150000 g ( 41000 r/min 于 Beckman Ti50 转子中）离心 24 h 或 160000 g ( 36000 r/min 于 Beckman SW50.1 转 子中）离心 24 h。
7. 如步骤 5 所述收集噬菌体颗粒带，于 CsCl 溶液中 4℃ 密封保存于一试管中。
8. ( 可供选择）如果必要，噬菌体颗粒可通过新一轮的 CsCl 平衡梯度离心进一步纯化和浓缩。将噬菌体悬浮液转移至适宜于 Beckman SW50.1 转子（或相当型号）的一个或多个超离管中，加入 CsCl 溶液（ρ=1.5 g/ml 于 SM 中），160000 g ( 36000 r/min 于 Becrkman SW50.1 转子中）4℃ 离心 24 h。当离心完成后，如下面“替代方案”的步骤 3 和 4 所述收集噬菌体颗粒。
1. 缓冲液和溶液
(1) CsCl（固体）
(2) CsCl 溶液
(3) 乙醇
2. 离心机和转子
(1) Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号
(2) Beckman Ti50 或 SW50.1 转子或相当型号，配有清亮的离心管（如 Beckman 超亮离心管）
3. 专用设备
皮下注射用针头（21号）
4. 载体和菌株
λ 噬菌体悬浮液
二、方法
1. 测定噬菌体悬浮液的体积，每毫升加入 0.5 g 固体 CsCl，搅拌混匀使其完全溶解。
2. 倒入足够量的 CsCl 分级梯度，使噬菌体悬浮液分成几个组分，每个梯度能容纳约 16 ml 噬菌体悬浮液。所需分级梯度的量等于亲水相的最终体积（步骤1），亲水相又被分成数份，每份为 0.4 X 离心管体积。用适合于 Beckman SW41 或 SW28 转子（或相当型号）的清亮塑料离心管（如 Beckman 超亮离心管)。
3. 在 ρ=1.50 g/ml 和 ρ=1.45 g/ml 两层界面的相应试管壁外侧，用永久性标签笔作上标记。
CsCl 分级梯度大约占超离管体积的 60%。比如，对一个能装 38 ml 的 Beckman SW28 试管（或相当型号），分级梯度由三种均为 7.6 ml 的 CsCl 溶液组成。平衡管装有同样密度的 CsCl 溶液。
4. 小心地将噬菌体悬浮液加至分级梯度上，4℃，87000 g ( 22000 r/min 于 Beckman SW28 转子中）离心 2 h。
5. 按下面的方法对离心管进行穿孔，以收集噬菌体颗粒。
(1) 用酒精仔细地擦去离心管外的油污，然后在离心管的外侧贴上 Scotch 胶带，与噬菌体颗粒带平齐。
胶带起到封条的作用，防止针头四周渗漏。
(2) 用 21 号皮下注射用针头（不需要注射针筒）穿过胶带刺入离心管，收集噬菌体颗粒带。
手指远离针头刺入方向，以免剌穿离心管。注意不要使梯度中其他带内物质污染噬菌体颗粒。这些带内含有细胞碎片和未装配的噬菌体成分。
6. 将噬菌体颗粒悬浮液装入适宜于 Beckman Ti50 或 SW50.1 转子（或相当型号）的超离管中，加入 CsCl 溶液（ρ=1.5 g/ml 于 SM 中)。4℃，150000 g ( 41000 r/min 于 Beckman Ti50 转子中）离心 24 h 或 160000 g ( 36000 r/min 于 Beckman SW50.1 转 子中）离心 24 h。
7. 如步骤 5 所述收集噬菌体颗粒带，于 CsCl 溶液中 4℃ 密封保存于一试管中。
8. ( 可供选择）如果必要，噬菌体颗粒可通过新一轮的 CsCl 平衡梯度离心进一步纯化和浓缩。将噬菌体悬浮液转移至适宜于 Beckman SW50.1 转子（或相当型号）的一个或多个超离管中，加入 CsCl 溶液（ρ=1.5 g/ml 于 SM 中），160000 g ( 36000 r/min 于 Becrkman SW50.1 转子中）4℃ 离心 24 h。当离心完成后，如下面“替代方案”的步骤 3 和 4 所述收集噬菌体颗粒。
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