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细胞技术

DH5a感受态细胞的制备

2025-02-26 细胞技术 加入收藏
1.挑取-20℃保存的DH5а单菌落接种于3ml的LB液体培养基中,37℃160r/min培养过夜(此为一级培养) 2.将一级培养菌液接2%的量接种于5ml新鲜

1.挑取-20℃保存的DH5а单菌落接种于3ml的LB液体培养基中,37℃160r/min培养过夜(此为一级培养)

 

2.将一级培养菌液接2%的量接种于5ml新鲜LB液体培养基中,37℃,200r/min,培养2.5~3.0h,使细菌进入对数生长期。(OD600=0.6左右)  

3.将二级培养产物分装到1.5ml离心管,冰浴30min.  

4. 4000r/min离心10min,弃上清。  

5.加750ul0.1mol/l冷CaCL2液悬浮菌体。  

6.4000r/min,弃上清,加入80ul预冷的CaCL2(0.1mol/l)重悬菌体。  

7. 制备好的感受态课冰浴过夜(不课超过48ml)成直接用于转化或加无菌甘油(15~20%)―70℃长期保存。


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