Annexin V/PI双染色法

1．细胞收集：悬浮细胞直接收集10ml的离心管中，而帖壁细胞先用滴管轻轻吹打，调亡细胞一经吹打可能脱壁，收集到10ml的离心管中，没脱壁的细胞用0.02％的EDTA消化使之脱壁，每样本细胞数为（1～5）×106，500～1000r/min离心5min弃去培养液。 2．用孵育缓冲液洗1次，500～1000r/min离心5min。 3．用100μl的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10～15min。 4．500～1000r/min离心5min沉淀细胞，孵育缓冲液洗1次。 5．加入荧光溶液4℃下孵育20min，避光并不时振动。