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细胞技术

核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察

2025-03-07 细胞技术 加入收藏
一、实验目的   1 了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。   2 了解细胞中DNA和RNA的分布。 二、反应原理 1.Feulgen反应:   DNA经弱

一、实验目的   1 了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。   2 了解细胞中DNA和RNA的分布。 二、反应原理 1.Feulgen反应:   DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff(无色品红亚硫酸溶液)试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。

紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团),所以凡含有DNA的部位,就呈紫红色。而RNA用此法处理后则分解。反应式如下:       2.Unna染色法:   1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛宁(mehtyl-green-pyronim)染色法。1902年Unna对这一方法进行了改良。1940年Brachet研究证明用甲基绿—哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌洛宁混合染料处理细胞后,由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同, 而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。 DNA被甲基绿染成绿色,RNA被哌洛宁染成红色, 这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。


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