总 RNA 提取实验(氯化锂提取法)
原理用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA 酶，用氯化锂选择沉淀RNA ，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA ，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及
原理
用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA 酶，用氯化锂选择沉淀RNA ，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA ，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA 得率不高，小RNA 片断丢失的缺陷。
材料与仪器
微生物 动物细胞 植物组织
氯化锂 尿素 Tris-HCL EDTA SDS
恒温水浴 冷冻高速离心机 紫外分光光度计 取液器 电泳仪 电泳槽
氯化锂 尿素 Tris-HCL EDTA SDS
恒温水浴 冷冻高速离心机 紫外分光光度计 取液器 电泳仪 电泳槽
步骤
一、组织或细胞匀浆
1. 对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5~10 ml 氯化锂-尿素溶液，匀浆器高速匀浆2分钟。
2. 对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5 ml 氯化锂-尿素溶液手工匀浆，并转移至Eppendof管中。
1. 对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5~10 ml 氯化锂-尿素溶液，匀浆器高速匀浆2分钟。
2. 对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5 ml 氯化锂-尿素溶液手工匀浆，并转移至Eppendof管中。
二、纯化
1. 匀桨液在0~4℃放置4小时后，12 000 g 离心30分钟。
1. 匀桨液在0~4℃放置4小时后，12 000 g 离心30分钟。
2. 取沉淀，加入原匀桨液1/2体积的氯化锂-尿素溶液，重复步骤1。
3. 沉淀用原匀浆液1/2体积的氯化锂-尿素溶液复溶后，加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15~30分钟并不时摇动混匀，4 000 g 离心5分钟。
4. 取上层水相，加1/10倍体积的3 M 乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，-20℃放置1小时，5 000 g 离心。
5. 70%乙醇洗沉淀一次，真空干燥。
6. RNA 溶解液溶解沉淀，得RNA 。
三、保存
分装，于-70℃保存。
三、保存
分装，于-70℃保存。
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