病毒转化细胞技术

1．血液制备：柠檬酸（Citric Acide）或肝素抗凝取血1～2ml，分装入管中，每管0.5ml全血，置于4℃冰箱中30分钟。 2．EBV病毒转化：从液氮中取出冻存的0.5ml全血，在37℃水中迅速解冻。 3．将解冻细胞与10ml不含血清的RPMI 1640混合，2500 rpm离心2分钟，弃上清，用含20％的胎牛血清、青、链霉素和庆大霉素的RPMI 1640生长培养基重悬细胞。 4．加入0.3～0.5ml的EBV病毒液，37℃ 水浴 30分钟～2小时，并不时摇动，以免出现凝块。 5．分装入50ml的 培养瓶 中，同时补加适量培养液，置入含5％CO2温箱中，100％温度下培养。 6．一周后加补入2ml培养基。 7．经常镜检培养物，每3～4天加液或换液，随细胞数量增多，可分装入大瓶中培养。