蛋白酶切的基础问题

问：我在蛋白方面比较菜，我有个蛋白需要做酶切，蛋白表达主要是以包涵体为主，溶解在8mol/l 尿素，或者1%SDS中，蛋白已经变性了，请问蛋白酶切是否能在变性的条件下酶切，还是一定要等到蛋白复性以后才能酶切? 还请指点一二。能否这样做，就是把变性的蛋白通过透析成酶切的缓冲液体系，然后再酶切，这样那些变性的尿素和SDS都去除，不知道这样操作符不符合理论？

答：既然你的蛋白是包涵体，为什么不直接连接到pet21或者pet24中，这样蛋白表达出来之后就是没有tag，就少了酶切这一步了，不是吗？

问：是这样，我的课题是接着我上届的师兄做的，有个3C蛋白酶切位点，表达的是膜蛋白，纯化后需要酶切下来才行，但是我一直都没有搞清一个概念，尿素等溶解蛋白是是变性剂，比如TRITON0100那些非离子去污剂溶解蛋白是非变性条件，两者对蛋白来说有什么区别和不同呢，好象膜蛋白一般都是用TRITON-100来溶的，我表达饿这个膜蛋白不溶于TRIOTON ，而容于SDS或者尿素，我纯化后该如何处理才能酶切呢？还请赐教。

答：是这样，尿素和盐酸胍是让蛋白变性的，如果复性要去掉他们。triton x100或者sds之类的去垢剂是为了不溶于水的蛋白，例如你的膜蛋白，溶于水中的。

你可以查找一些关于膜蛋白复性的文章看看。

去垢剂，如果很强也可以让蛋白变性，只是和尿素不是一样的机理。