脂类染色法
脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红O等。脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度(37℃-60℃)对组织切片染色效果是有好处的。
脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。
一、苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)染色法:
操作方法:
(1) 固定于10%甲醛的组织。
(2) 水洗后采用冰冻或石蜡切片。
(3) 经蒸馏水后,浸染于Harris苏木素 或明矾苏木素中淡染1-2分钟。
(4) 自来水冲洗。
(5) 水洗后,移入70%酒精5秒钟。
(6) 投入苏丹Ⅲ染液中约30分钟或更长时间,置于56℃温箱中。
(7) 在70%酒精中洗涤5-10秒钟。
(8) 洗于蒸馏水中,然后将切片移于载玻片上。
(9) 切片移于玻片上,将切片周围的水分小心擦掉。
(10) 甘油明胶封固。
结果:脂肪呈橙红色或鲜红色或黑色,胆脂素呈淡红色,脂肪酸不着色,细胞核呈蓝色。
试剂配制:
1、苏丹Ⅲ染液配法:将0.15克苏丹Ⅲ溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中(各50ml),临用时过滤,所得滤液即为饱和浓度。
注:浸染时,容器必须盖好,否则酒精或丙酮挥发,染料沉淀。
2、甘油明胶配制:
明胶 40g
蒸馏水 210ml
甘油 250ml
石碳酸结晶 5ml
先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间,然后加甘油和石碳酸,加热15分钟,摇搅直至混合液均匀为止。