组织化学与免疫组织化学染色标本的石蜡包埋

组织化学与免疫组织化学染色标本的石蜡包埋组织化学与免疫组织化学染色标本常用石蜡切片和冰冻切片。对于柔软的胚胎组织或脑也可用琼脂包埋后振动切片机切片。用于免疫组织化学染色的石蜡切片(paraffin secdon)与常规HE染色的石蜡切片基本 制片过程相同。石蜡切片的优点是组织结构保存良好，结构清晰，能连续切片，抗原定位准确，更适合回顾性研究。固定好的组织在切片前要经石蜡包埋封存，而石蜡与水不相溶。故需用乙醇脱去组织内多余水分。脱去水分后组织中的乙醇仍与石蜡不相溶，故还需用二甲苯替换乙醇。并使组织透明，然后经透明的组织人熔化的石蜡中浸透，最终包埋和切片。其基本步骤如下： 《一》包埋前脱水常用梯度乙醇溶液作为脱水剂，脱水的时间长短与组织块的大小和结构有关。用于HE染色的组织标本脱水时，可以在?0％或80％乙醇中长期保存，90％乙醇4小时一95％乙醇4小时一100％乙醇1 2小时一100％乙醇Ⅱ2小时。用于免疫组织化学染色的组织块脱水和透明均应在4~C下进行，以减少组织抗原的损失，此外不能在70％乙醇中长时间浸泡。脱水过程是：70％乙醇3～4小时一30％乙醇3―4小时一90％乙醇2～3小时一95％乙醇2―3小时一100％乙醇T1．5～2小时一100％乙醇Ⅱ1．5～2小时。对于组织块小而柔软的组织还可适当缩短每一步脱水时间，如胚胎组织应从30％乙醇开始脱水，以防止组织变脆。《二》透明常用的透明剂是二甲苯，透明的时间长短与组织的大小和结构有关。一般过程是：二甲苯1 0．5～1小时，二甲苯Ⅱ0．5～1小时。应注意脱水和透明的时间一定要充分，否则不利于浸蜡，易使石蜡与组织之间形成夹层而使切片困难。但时间也不能过长，否则组织变得过硬，不便于浸蜡，且易引起切片时脆裂。《三》浸蜡经透明的组织人熔化的石蜡中浸透，一般需经3次，每次0.5～1小时，其时间的长短与组织大小和结构有关，可以灵活掌握。浸蜡时间不能过长或不足。其结果与脱水、透明不充分或过长结果相似。用于HE染色的标本浸蜡和包埋的温度可限于65℃，而用于免疫组织化学的标本浸蜡和包埋温度不能高于60℃，否则高温在非缓冲体系下会破坏组织中抗原。因此最好选择低熔点软蜡(56～58℃)。《四》包埋浸透石蜡的组织块要人新的石蜡中冷却凝固，即包埋(embeding)。包埋时，包埋器中倒人熔化的新蜡，在其凝固之前迅速放人组织块，放人前要分清组织的各个面，将所需断面朝下。包埋有腔组织时，需平放或立放，以获得所需断面。 《五》修块石蜡凝固后．组织便包封在石蜡内。切片前需把包有组织的蜡块修成一定形状，并且把各个面修平，注意不能把蜡边与组织边靠得太近，也不能太远，近则不易连片，远则废刀。在修块时选适当的地方做标记，便于日后辨认。