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M 其他相关 问题集目录 Q-1：使用IPTG（Dioxane free）时需要注意什么?································································2 Q-2：使用X–Gal时需要注意什么?·····················································································2 Q-3：使用DEPC处理水（RNase Free）时需要注意什么?·····················································2 Q-4：使用10×Loading Buffer时需要注意什么?·································································2 Q-5：使用6×Loading Buffer时需要注意什么?···································································2 Q-6：使用核酸共沉剂时需要注意什么?·················································································2 Q-7：使用E.coli Competent Cells JM109/DH5α时需要注意什么?·······································2 Q-8：使用E.coli Competent Cells HB101时需要注意什么?·················································2 Q-9：使用电转化感受态细胞时需要注意什么?·······································································3

Q-1：使用IPTG（Dioxane free）时需要注意什么? A-1：使用IPTG（Dioxane free）时需要注意如下事项： 1. 培养噬菌体时，Top agar中的添加量为：25 μl/3 ml（IPTG浓度为24 mg/ml时）。 2. 含有IPTG的培养基4℃避光保存，须在1~2周内使用。 3. 因IPTG对各种载体的诱导活性有差异，所以，在进行大规模诱导培养时，请先进行小试实验。 Q-2：使用X–Gal时需要注意什么? A-2：使用X–Gal时需要注意如下事项： 1. 培养噬菌体时，Top agar中的添加量为：50 μl/3 ml（X-Gal浓度为20 mg/ml时）。 2. 含有X-Gal的培养基4℃避光保存，须在1~2周内使用。 3. 使用DMF（二甲基甲酰胺）溶解。 Q-3：使用DEPC处理水（RNase Free）时需要注意什么? A-3：本制品经高温高压灭菌后溶液中已不含DEPC，使用时应避免RNase污染。 Q-4：使用10×Loading Buffer时需要注意什么? A-4：使用10×Loading Buffer时需要注意如下事项： 1. 10×Loading Buffer中含有SDS，-20℃保存后SDS会出现沉淀，首次使用时，请于50℃左右水浴中保温溶解后使用。 2. 开封后室温保存时，有时也会出现SDS沉淀，此时，请在水浴中保温溶解后使用。 Q-5：使用6×Loading Buffer时需要注意什么? A-5：本制品不能作为蛋白质凝胶电泳（如：SDS-PAGE）中的Loading Buffer使用。 Q-6：使用核酸共沉剂时需要注意什么? A-6：使用核酸共沉剂时需要注意如下事项： 1. 本制品既可用于DNA样品，也可用于RNA样品。 2. DNA浓度极低（小于10 ng/ml）时，回收率会有所下降。 3. DNA溶液的体积小于400 μl时，DNAmate的添加量皆为4 μl；DNA溶液的体积大于400 μl 时，可按每100 μl的DNA溶液添加1 μl DNAmate的比例增加DNAmate的使用量。 4. 操作中不需要把DNA溶液低温放置，混匀后即可直接离心回收。 5. 要严格按照操作方法的先后顺序加样，必须先加入DNAmate并充分混匀后再加乙醇。 Q-7：使用E.coli Competent Cells JM109/DH5α时需要注意什么? A-7：使用E.coli Competent Cells JM109/DH5α时需要注意如下事项： 1. 一定要用干冰运输。 2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存（融化后的感受态细胞不能再冻结保存）。 3. 转化时请使用传热性能较好的试管。一般的1.5 ml微型离心管也可使用，但转化效率会有所下降。 4. 对100 μl的感受态细胞，用于转化的质粒DNA量请控制在10 ng以下，并保证DNA溶液 的体积在20 μl以下，否则会影响转化效率。 5. 除SOC培养基以外，LB培养基或Фb-broth也可以使用，但有时效率稍低。 6. 包装中附有0.01 ng/μl的pUC19 DNA，供作对照实验使用。 Q-8：使用E.coli Competent Cells HB101时需要注意什么? A-8：使用E.coli Competent Cells HB101时需要注意如下事项： 1. 一定要用干冰运输。 3 2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存（融化后的感受态细胞不能再冻结保存）。 3. 转化时请使用传热性能较好的试管。一般的1.5 ml微型离心管也可使用，但转化效率会有所下降（此时请在使用方法5.的42℃下放置60秒）。 4. 对100 μl的感受态细胞，用于转化的质粒DNA量请控制在10 ng以下，并保证DNA溶液的体积在20 μl以下。否则会影响转化效率。 5. 除SOC培养基以外，LB培养基或Фb-broth也可以使用，但有时效率稍低。 6. 包装中附有0.1 ng/μl的pBR 322 DNA，供作对照实验使用。 Q-9：使用电转化感受态细胞时需要注意什么? A-9：使用电转化感受态细胞时需要注意如下事项： 1. 一定要用干冰运输。 2. 不立即使用的Electro-Cells请在-80℃保存（融化后的Electro-Cells不能再冻结保存）。 3. 导入分子量较大的DNA（＞7 kbp）时，转化效率稍低。 4. 使用SOC培养基的地方也可使用LB培养基，但转化效率会有所下降。 5. 除SOC培养基以外，LB培养基或Фb-broth也可以使用，但有时效率稍低。 6. 50 μl的电转化细胞中，转化的质粒DNA量不能超过10 ng，否则效率会下降。