总氮含量的测定

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一、目的 加深理解蛋白质是生命物质基础；掌握半微量凯氏定氮法测定总氮含量原理和方法。 二、原理 蛋白质是生命的物质基础，是构成生物体细胞组织的重要成分，蛋白质是含氮的有机化合物，是有机态氮的表现形式。样品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即得蛋白质含量。用反应式表示如下： 三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 植物 、动物组织及食品 2．主要仪器 （1）自动回流消化仪 （2）凯氏定氮仪 图2 微量凯氏定氮蒸馏装置

3．试剂 （1）0.1%甲基红乙醇液：称取0.1g 甲基红溶于100mL 60%乙醇中。 （2）0.1%溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.1g 溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中。 （3）0.2%溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.2g 溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中。 （4）40%氢氧化钠：称取40gNaOH 溶于水中，定容至100mL。 （5）2%硼酸：称取2g 硼酸用水溶解并定容至100mL。 （6）0.05mol/L 盐酸标准溶液配制：量取4.5mL 盐酸，加水稀释至1 000mL。 （7）溴甲酚绿-甲基红混合指示剂制备：量取30mL 0.2%溴甲酚绿乙醇溶液加入20mL0.1%甲基红乙醇溶液，混匀。 （8）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：1 份（5mL）0.1%甲基红乙醇溶液与5 份（25mL）0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。 （9）其他试剂：无水碳酸钠、硫酸、硫酸铜，硫酸钾均为分析纯